[发明专利]一种诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针，其特征在于：所述的筛选探针为在适配体SYL3C的5’端修饰在适配体SYL3C的3’端修饰6-羧基荧光素，形成的探针TPE-SYL3C-FAM。

2.根据权利要求1所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针，其特征在于：所述的筛选探针为在适配体SYL3C的5’端修饰氨基，在3’端修饰6-羧基荧光素，得到H₂N-SYL3C-FAM，再在H₂N-SYL3C-FAM的5’端氨基修饰四苯乙烯得到探针TPE-SYL3C-FAM。

3.一种权利要求1所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针的制备方法，其特征在于：包括：以水和DMSO的混合溶剂为反应溶剂，H₂N-SYL3C-FAM与[1-(4-羧基苯基)-1,2,2-三苯基]乙烯N-羟基琥珀酰亚胺酯反应得到探针。

4.根据权利要求3所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针的制备方法，其特征在于：所述的H₂N-SYL3C-FAM与[1-(4-羧基苯基)-1,2,2-三苯基]乙烯N-羟基琥珀酰亚胺酯的质量比为2:1～5:1。

5.根据权利要求3所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针的制备方法，其特征在于：所述的反应的温度为4～37℃，反应的时间为12～24h。

6.根据权利要求3所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针的制备方法，其特征在于：反应结束后，反应液装入截留分子量3kD的超滤离心管，超滤离心得到探针。

7.一种权利要求1所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针的制备方法，其特征在于：包括：配制浓度为5～10.5mg·mL^-1的H₂N-SYL3C-FAM水溶液，按照H₂N-SYL3C-FAM与[1-(4-羧基苯基)-1,2,2-三苯基]乙烯N-羟基琥珀酰亚胺酯的质量比为2:1～5:1，加入浓度为20mg·mL^-1的[1-(4-羧基苯基)-1,2,2-三苯基]乙烯N-羟基琥珀酰亚胺酯的DMSO溶液，搅拌反应，反应液超滤离心得到探针。

8.权利要求1所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针在筛选EMT相关的药物的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的EMT相关的药物为诱导上皮肿瘤细胞产生EMT副作用的药物、拮抗EMT过程的化疗增敏剂。

10.一种采用权利要求1所述的诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针筛选EMT相关的药物的方法，其特征在于：

EMT相关的药物为诱导上皮肿瘤细胞产生EMT副作用的药物时，包括：将可传代的肿瘤细胞接种于黑色96孔板中，置于37℃、含5％CO₂的细胞培养箱中培养24h，弃去培养基，加入浓度为5μM待测药物，37℃孵育24h，PBS清洗，加入由PBS缓冲液配制的浓度为10nM的权利要求1所述的探针溶液，孵育；以不含待测药物的PBS缓冲液为空白对照组；以多功能酶标仪检测器(λex＝306nm，λem＝445nm)测得荧光强度I₄₄₅/I₅₂₄；采用MTT法测定细胞活力；对待测药物和空白对照组的荧光强度进行归一化处理：

MTT归一化荧光强度＝荧光强度/细胞活力；

与空白对照组相比，若待测药物的MTT归一化荧光强度降低，表示待测药物诱上皮导癌细胞产生EMT转化；

EMT相关的药物为拮抗EMT过程的化疗增敏剂时，包括：将可传代的肿瘤细胞接种于黑色96孔板中，置于37℃、含5％CO₂的细胞培养箱中培养24h，弃去培养基，以无胎牛血清培养基饥饿细胞48h，PBS清洗，继续以含5ng·mL^-1TGF-β1和1～10μM待测化疗增敏剂的无胎牛血清培养基处理细胞48h，以只含5ng·mL^-1TGF-β1的无胎牛血清培养基培养细胞48h作为对照组；弃去培养基，PBS清洗，加入由PBS缓冲液配制的浓度为10nM的权利要求1所述的探针溶液，孵育；以多功能酶标仪检测器(λex＝306nm，λem＝445nm)测得荧光强度I₄₄₅/I₅₂₄；采用MTT法测定细胞活力；对待测化疗增敏剂和对照组的荧光强度进行归一化处理：

MTT归一化荧光强度＝荧光强度/细胞活力；

与对照组相比，若待测化疗增敏剂的MTT归一化荧光强度增加，表示待测化疗增敏剂拮抗EMT过程。