[发明专利]倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明公开了倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明所述的倍半萜类化合物是从曲霉属真菌Aspergillusaureoterrus GDMCC 3.619的发酵培养物中分离制备得到。经试验证明，化合物对人早幼粒白血病细胞（HL‑60）、肝癌细胞（HepG‑2）和卵巢腺癌细胞（SKOV‑3）具有较强的抑制活性，可以用于制备抗急性早幼粒白血病、肝癌或卵巢腺癌药物。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

真菌是一种广泛存在于自然界，主要来源有土壤、海洋、植物、动物等，其可产生大量结构多样且具有生物活性的次生代谢产物，包括芳香聚酮、萜类、生物碱等各种类型的复杂结构。Aspergillusaureoterrus GDMCC3.619是一株来源于土壤的曲霉属真菌。到目前为止，还没有关于该模式菌株次生代谢产物的报道，亟待对其做深入研究。

发明内容

本发明的第一个目的是提供具有抑制肿瘤活性的倍半萜类化合物。

本发明的化合物，其结构如式（І）所示：

式（І）

本发明的第二个目的是提供上述倍半萜类化合物的制备方法，所述的化合物是从曲霉属真菌Aspergillusaureoterrus GDMCC 3.619的发酵培养物中分离制备得到，具体包括以下步骤：

（1）制备曲霉属真菌Aspergillusaureoterrus GDMCC 3.619的液体发酵培养物，将液体发酵培养物过滤并用乙酸乙酯溶液提取，浓缩提取液得到粗浸膏；

（2）得到的粗浸膏经过硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯以体积比为50:1, 20:1,10:1, 5:1, 2:1, 1:1, 0:1和乙酸乙酯-甲醇以体积比为20:1, 10:1, 0:1依次作为洗脱剂，梯度洗脱，收集石油醚：乙酸乙酯体积比5:1洗脱获得的且经TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇=30:1（v/v）展开得R_f=0.6-0.7的组分Fr.3；

将组分Fr.3经Sephadex LH-20柱层析分离，用纯甲醇作为洗脱剂洗脱，收集TLC薄层层析以二氯甲烷：甲醇=30:1（v/v）展开得R_f=0.7的组分Fr.3B；

将组分Fr.3B用HPLC分离纯化得到化合物1。

进一步的，所述的组分Fr.3B用HPLC分离纯化具体为：将组分Fr.3B经半制备HPLC分离，使用Agilent Polaris 5 C18-A柱，流动相为体积比72:28的乙腈-水，流速为3 mL/min，收集保留时间为23.1 min的洗脱组分，得到化合物1。

进一步的，所述的步骤（1）制备曲霉属真菌Aspergillusaureoterrus GDMCC3.619的液体发酵培养物具体步骤为：挑取曲霉属真菌Aspergillusaureoterrus GDMCC3.619的菌丝体接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，在28℃条件下静置培养5天，然后取约1×1 cm²带有菌丝的琼脂块接种于马铃薯葡萄糖肉汤（PDB）液体培养基中，28℃、160 rpm/min条件下培养16天，制得液体发酵培养物，所述的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，每升通过以下方法配制：将200 g马铃薯粉，20 g葡萄糖和20 g琼脂，加1000 mL蒸馏水，加热溶化，灭菌制得；所述的PDB培养基是通过以下方法配制的：按每200 g马铃薯粉、20 g葡萄糖与1000mL水混合灭菌制得。