[发明专利]制备在利用核酸聚合酶来检测核酸时使用的高精度核酸的方法

权利要求书

1.一种制备具有高灵敏度的核酸的方法，所述方法包括：

1)通过使包括核酸、核酸聚合酶、酶反应缓冲液和核酸聚合终止子的反应混合物反应来终止所述核酸的3’末端，所述核酸聚合终止子抑制所述核酸的3’末端的延伸；和

2)从所述反应混合物中灭活或消除未反应的游离的核酸聚合终止子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸聚合反应通过引发而起始。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述核酸聚合反应为选自由以下反应构成的组中的至少一种：RNA依赖型RNA聚合酶反应、DNA依赖型RNA聚合酶反应、RNA依赖型DNA聚合酶反应和DNA依赖型DNA聚合酶反应。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)中的核酸被分离并纯化以便能够终止反应。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸为RNA或DNA，所述核酸聚合酶为选自由以下物质构成的组中的至少一种：RNA依赖型RNA聚合酶、RNA依赖型DNA聚合酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述RNA依赖型RNA聚合酶为来自黄病毒的NS5酶。

7.根据权利要求5所述的方法，其中所述RNA依赖型DNA聚合酶为选自由以下物质构成的组中的至少一种：MMLV逆转录酶、AMV逆转录酶和HIV逆转录酶。

8.根据权利要求5所述的方法，其中所述RNA聚合酶为作为3’末端转移酶的poly(A)聚合酶。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸聚合终止子是类核酸化合物，所述类核酸化合物以能够作用于所述核酸聚合酶的三磷酸酯形式被活化，而无所述核酸的3’羟基的羟基。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述类核酸化合物选自由以下物质构成的组中的至少一种：2’3’-双脱氧核苷5’-三磷酸、3’-脱氧腺苷5’-三磷酸、3’-叠氮-3’-脱氧胸苷5’-三磷酸、1-β-d-阿拉伯呋喃糖核苷酸5′-三磷酸、无环鸟苷三磷酸、3’-氨基-3’-脱氧核苷酸5’-三磷酸和3’-氟-3’-脱氧核苷酸5’-三磷酸。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述脱氧核苷三磷酸为选自鸟苷、腺苷、胸苷、尿苷和胞苷中的至少一种。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述步骤2)中灭活核酸聚合终止子为水解三磷酸酯的磷键水解酶。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述磷键水解酶为选自由以下物质构成的组中的至少一种：来自大肠杆菌、牛小肠和虾的碱性磷酸酶，和自分泌运动因子。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤2)中消除核酸聚合终止子是通过使用凝胶过滤或离液剂来实现。

15.一种用于制备核酸的试剂盒，所述核酸是用于制备在使用核酸聚合反应来扩增和检测核酸时使用的核酸的制备方法所需的，包括核酸聚合酶、酶反应缓冲液和核酸聚合终止子，其中所述核酸聚合终止子抑制所述核酸的3’末端的延伸。

16.根据权利要求16所述的试剂盒，其中所述核酸聚合酶为选自由以下物质构成的组中的至少一种：RNA依赖型RNA聚合酶、RNA依赖型DNA聚合酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶。

17.根据权利要求16所述的试剂盒，其中所述RNA依赖型RNA聚合酶为来自黄病毒的NS5酶。