[发明专利]一种可诱导自然杀伤细胞缺陷小鼠模型的构建方法及应用

权利要求书

1.一种针对小鼠Ncr1基因的gRNA，其特征在于，所述gRNA的序列如SEQ ID NO:5所示。

2.一种用于构建可诱导自然杀伤细胞缺陷小鼠模型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

（1）针对小鼠Ncr1基因的gRNA，所述gRNA的序列如SEQ ID NO:5所示；

（2）包含白喉毒素受体编码序列的同源重组载体；

（3）Cas9 mRNA，所述试剂盒包括的同源重组载体为针对小鼠Ncr1基因的同源重组载体，所述载体从左到右顺序包括：重组左臂、核糖体接入位点序列、白喉毒素受体编码序列与绿色荧光蛋白编码序列融合序列元件、重组右臂，所述重组左臂、核糖体接入位点序列、白喉毒素受体编码序列与绿色荧光蛋白编码序列融合序列元件、重组右臂的序列分别如SEQ ID NO:11-14所示，所述同源重组载体为PBR322，所述试剂盒还包括针对重组左臂的鉴定引物对P1和P2和针对重组右臂的鉴定引物对P3和P4，所述P1和P2的序列分别如SEQ IDNO:15-16所示，所述P3和P4的序列分别如SEQ ID NO:17-18所示。

3.权利要求1所述的gRNA在制备可诱导自然杀伤细胞缺陷小鼠模型的试剂盒中的应用。

4.一种构建可诱导自然杀伤细胞缺陷小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）取小鼠的受精卵；

（2）将包含白喉毒素受体编码序列的同源重组载体、Cas9 mRNA以及权利要求1所述的gRNA混合后,进行受精卵显微注射；

（3）将显微注射后的受精卵经培养箱短暂培养后，移植至受体母鼠的输卵管，获得基因修饰小鼠F0代小鼠；

（4）对F0代小鼠抽提基因组，分别利用针对同源左臂的鉴定引物对和同源右臂的鉴定引物对进行同源重组鉴定，所述同源重组载体为针对小鼠Ncr1基因的同源重组载体，所述载体从左到右顺序包括：重组左臂、核糖体接入位点序列、白喉毒素受体编码序列与绿色荧光蛋白编码序列融合序列元件、重组右臂，所述重组左臂、核糖体接入位点序列、白喉毒素受体编码序列与绿色荧光蛋白编码序列融合序列元件、重组右臂的序列分别如SEQ ID NO:11-14所示，所述同源重组载体为PBR322，所述针对重组左臂的鉴定引物对包括P1和P2，所述针对重组右臂的鉴定引物对包括P3和P4，所述P1和P2的序列分别如SEQ ID NO:15-16所示，所述P3和P4的序列分别如SEQ ID NO:17-18所示，其中左臂和右臂鉴定均扩增出4.0kb大小的条带。