[发明专利]一种雷诺嗪中毒性杂质的检测方法

说明书

本发明提供一种雷诺嗪中毒性杂质的检测方法。所述雷诺嗪中毒性杂质的检测方法包括以下步骤：(1)分别配制雷诺嗪的供试品溶液和2,6‑二甲苯胺的对照品溶液；(2)将步骤(1)得到的雷诺嗪的供试品溶液和2,6‑二甲苯胺的对照品溶液分别注入高效液相色谱‑串联质谱仪进行检测，并采用外标法计算雷诺嗪供试品中2,6‑二甲苯胺的含量。本发明所述雷诺嗪中毒性杂质的检测方法具有专属性强，分析快速，抗干扰性强以及灵敏度高等优点。

技术领域

本发明属于化学分析检测技术领域，具体涉及一种雷诺嗪中毒性杂质的检测方法。

背景技术

雷诺嗪是一种钙离子通道摄取的抑制剂抗心绞痛药物，用于治疗慢性心绞痛。雷诺嗪原料药/雷诺嗪缓释片未有药典收录，目前尚未见雷诺嗪原料药中具有基因毒性警示结构杂质的报道。

根据人类药品注册技术要求国际协调会议(ICH)M7(R1)的规定，具有基因毒性警示结构的杂质，如果没有进行细菌诱变试验证明其无基因毒性，即为潜在毒性杂质，人在长期用药时，其每日摄入量不能超过1.5μg。雷诺嗪原料药的一个关键工艺中间体的起始物料之一2,6-二甲苯胺，在世界卫生组织国际癌症研究机构致癌物列表中，属于2B类致癌物。而雷诺嗪临床给药最大剂量为2000mg，所以雷诺嗪原料及缓释片中该杂质的最大限度为0.75ppm。

CN100581547C公开了一种雷诺嗪缓释片及检测方法，属于药物分析领域。取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量，置50mL量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取雷诺嗪对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含80μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。色谱条件及系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-醋酸溶液＝25:35:40为流动相，用氨水调节pH至6.6，检测波长为230nm。

CN107144644A公开了一种立达霉有关物质的测定方法，所述的测定方法包括：(1)专属性试验，(2)稳定性试验，(3)最大的有关物质测定。所述的测定方法为运用HPLC测定2,6-二甲苯胺，色谱柱为C18柱，流动相为乙腈:磷酸水＝40:60，检测波长包括225nm，检测温度为30℃，流速为1.25mL/min，进样量为10μL。

然而，采用上述专利公开的方法均无法准确定量的检测雷诺嗪中基因毒性杂质2,6-二甲苯胺的含量。

因此，开发一种分析快速，抗干扰性强，灵敏度高的雷诺嗪中毒性杂质的检测方法是本领域的研究重点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种雷诺嗪中毒性杂质的检测方法。所述检测方法是一种专属性强，分析快速，抗干扰性强，灵敏度高的测定雷诺嗪原料药及雷诺嗪缓释片中特定基因毒性杂质的高效液相色谱-串联质谱分析方法。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种雷诺嗪中毒性杂质的检测方法，所述雷诺嗪中毒性杂质的检测方法包括以下步骤：

(1)分别配制雷诺嗪的供试品溶液和2,6-二甲苯胺的对照品溶液；

(2)将步骤(1)得到的雷诺嗪的供试品溶液和2,6-二甲苯胺的对照品溶液分别注入高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，并采用外标法计算雷诺嗪供试品中2,6-二甲苯胺的含量。

在本发明中，采用高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，在高效液相色谱仪中，供试品溶液与流动相A、B液在色谱柱上进行分离，采用等度洗脱方式进行洗脱；通过等度洗脱后的样本进入到串联质谱中，利用质谱仪进行离子谱图采集从而得到样本谱图；确定2,6-二甲苯胺的色谱峰。