[发明专利]融合蛋白及其应用

说明书

本发明提出了一种融合蛋白。该融合蛋白包括：靶向抗体以及TGFβ信号阻断因子，所述靶向抗体包括Fab区和Fc区，所述Fc区具有A327Q、G237A和L235A突变。根据本发明实施例的融合蛋白在靶向抗体的介导下，实现了TGFβ信号阻断因子在靶向区域的聚集，增加了药效，促进抗肿瘤免疫反应，且有效延长了TGFβ信号阻断因子的半衰期，更为重要的是，根据本发明实施例的融合蛋白与Fc受体(FcR)的结合力弱，ADCC效应低，药物的毒副作用显著降低。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，涉及融合蛋白及其应用，更具体地，涉及靶向抗体以及TGF β信号阻断因子的融合蛋白，以及编码这类融合蛋白的核酸、构建体、重组细胞、药物组合物及其制药 用途。

背景技术

抗体的Fc区与许多Fc受体及配体相互作用，行使一系列重要的功能，称为效应器功能 (effector function)。IgG抗体的Fc受体被称为FcγR，IgE的为FcεR，IgA的为FcαR等等。已经鉴 定了FcγR的三个亚类：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。Fc受体的另一种类型是新 生Fc受体(FcRn)。

由抗体Fc区介导的效应功能可以分为两种：(1)在抗体与抗原结合之后发挥作用的效应功能(这些功 能涉及参与补体级联反应或Fc受体(FcR)-负荷细胞)；和(2)不依赖于抗原结合而发挥作用的效应功能(这 些功能提供在血循环中的持续性和通过胞吞作用穿过细胞屏障的能力)。

近年来抗体Fc区常用来制备各种融合蛋白，融合蛋白的Fc段能够与各类免疫白细胞上表达的Fc γRs受体结合，从而产生Fc段介导的细胞毒作用(ADCC)以及补体依赖的细胞毒性(CDC)效应， 靶向杀伤功能蛋白受体阳性细胞，会影响融合蛋白发挥活性而为减弱治疗类融合蛋白Fc段与FcγRs受 体的亲和力而设计的基因突变，通常会导致融合蛋白与FcRn受体亲和力的下降，降低其在体内的半衰 期。

血管生成是从先前存在的脉管系统发展出新血管的过程。它在胚胎发育，组织正常生长，伤口愈合 中起重要作用，并且在许多疾病中起主要作用。在哺乳动物中，主要分离出5种参与血管生成的细胞因 子(Vascular endothelial growth factors,VEGFs)。这些细胞因子主要结合3种受体酪氨酸激酶—— VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3，以及一些共受体，包括硫酸肝素蛋白多糖(HSPGs)和神经毡蛋白。

VEGFR受体中，VEGFR1促进单核细胞和巨噬细胞的迁移。VEGFR1的可溶形式可以捕获VEGF， 竞争VEGF与VEGFR2的结合。VEGFR2参与正常生理过程和肿瘤的发生发展。VEGFR3对淋巴表皮 细胞发育起重要作用。

在哺乳动物中，主要有5个VEGF细胞因子，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及胎 盘生长因子(PlGF)。VEGF诱导血管生成和内皮细胞增殖，在调节血管生成中起重要作用VEGF-A有 几种剪接变体。主要的氨基酸包括：121、165、189和206个氨基酸，每个氨基酸都包含特定的外显子 添加。VEGF-A转录在缺氧时被激活并被激活的癌基因增强的转录因子，缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)。 正常氧中的VEGF转录被许多致癌基因激活，包括H-ras和几个跨膜酪氨酸激酶，例如表皮生长因子受 体和ErbB2。与正常组织相比，这些途径共同导致了肿瘤中VEGF-A的明显上调，并且通常具有预后意 义。

VEGF牵涉到与血管生成增强有关的其他几种病理状况。例如，VEGF在牛皮癣和类风湿性关节炎 中均起作用。糖尿病性视网膜病变与高眼内VEGF水平有关。VEGF功能的抑制可通过阻断黄体功能导 致不孕，阻断VEGF或者VEGFR2的抗体已直接证明了VEGF在肿瘤生长中的重要性。因此，对VEGF 功能的干扰已成为以阻断血管生成为目的的肿瘤药物开发的重要方向。