[发明专利]一种斑点叉尾鮰养殖池塘施肥方式的鉴别方法

说明书

本发明提供一种斑点叉尾鮰养殖池塘施肥方式的鉴别方法，通过提取养殖池塘内的斑点叉尾鮰肠道微生物总DNA，以总DNA为模板，针对乳杆菌属Lactobacillus种群16S rDNA基因的DNA序列设计引物，进行PCR扩增，若扩增产物没有1054bp条带，则判定养殖池塘使用的是无机肥。本发明斑点叉尾鮰池塘施肥方式的鉴别方法，可以快速、简便、准确、有效地鉴别斑点叉尾鮰养殖池塘的施肥方式，且操作简单，费用低廉，准确度高，鉴别结果稳定、可靠，能够解决斑点叉尾鮰施肥方式鉴别难的问题。

技术领域

本发明涉及水产生物鉴定技术领域，具体涉及一种斑点叉尾鮰养殖池塘施肥方式的鉴别方法。

背景技术

斑点叉尾鮰又称沟鲇，原产于北美，是美国最主要的淡水养殖鱼类，其肉质鲜、抗病力强、生长迅速、易起捕、适温较广，1980年代引入我国后，产业发展迅速，年产量已经突破30万吨，经过我国水产养殖业的不断改进和创新，我国斑点叉尾鮰的养殖规模、单位养殖产出等方面已经全面超越美国，取得较好的经济效益。在我国水产科技工作者总结出来的养殖八字经中第一个就是强调水，养鱼先养水已经成为水产养殖的先决条件。所谓养水就是通过不同的管理措施，保证池塘养殖水体肥、活、爽。这其中，施肥是水产养殖中普遍使用的操作，其目的是通过有机肥或无机肥的使用，增加浮游植物的生物量，提高池塘生产力，经过食物网复杂的吸收和循环过程，最终提高养殖鱼类的产量。

使用有机肥和无机肥会对养殖水体浮游动、植物群落产生不同的影响。无机肥施用池塘，总藻类生物量、绿藻生物量和硅藻生物量显著高于有机肥施用池塘。桡足类和枝角类等浮游动物是浮游群落中初级生产者向更高营养水平转移能量的主要通道。桡足类被发现会根据藻类的营养状况对食物颗粒进行主动的鉴别与选择，而枝角类主要根据食物的颗粒大小和形状进行选择。由于食草浮游动物群落与浮游植物群落直接相关，因此施用不同的肥料也会对浮游动物群落的组成造成影响。美国相关研究通过斑点叉尾鮰池塘施用不同肥料对浮游动、植物群落结构的影响分析，形成了斑点叉尾鮰养殖施肥推荐方案，即，使用无机肥可以使斑点叉尾鮰生长和养殖经济效益最大化。但是，在中国，肥料的成本、人工成本与美国存在差异，因此，养殖池塘的无机肥和有机肥使用情况都有存在。目前对于斑点叉尾鮰无法对其养殖过程中的施肥方式进行鉴别。因此建立斑点叉尾鮰施肥方式的鉴别方法，将对养殖斑点叉尾鮰的养殖过程追溯提供技术支撑。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种斑点叉尾鮰养殖池塘施肥方式的鉴别方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明提供一种斑点叉尾鮰养殖池塘施肥方式的鉴别方法，其包括以下步骤，(1)提取养殖池塘内的斑点叉尾鮰肠道微生物总DNA；(2)以总DNA为模板，针对乳杆菌属Lactobacillus种群16S rDNA基因的DNA序列设计引物，进行PCR扩增，若扩增产物没有1054bp条带，则判定养殖池塘使用的是无机肥。

优选的，步骤(1)中所述提取，其为通过采集养殖池塘内的斑点叉尾鮰肠道微生物，提取微生物总DNA。

优选的，步骤(2)中，所述引物，其正向引物SEQ ID NO:1序列为5'-TCTGGTATTGATTGGTGCTTG-3'，反向引物SEQ ID NO:2序列为5'-GCGGGACTTAACCCAACATC-3'。

优选的，步骤(2)中，所述进行PCR扩增，其反应体系为50μL：1μL模板DNA(50ng/μL)；PCR缓冲液5μL(10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl 2，0.01％明胶)；dNTP混合液4μL(每种dNTP 0.1mmol/L)；上、下游引物(10μmol/L)各1μL，2μL Taq酶(2IU)；双蒸水36μL。

优选的，步骤(2)中，所述进行PCR扩增，其扩增反应程序为：94℃预变性2min，94℃变性45s，60℃退火1min，72℃延伸1min，经30个循环后再72℃延伸10min。