[发明专利]一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法

权利要求书

1.一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)乌木外植体的选取：分别选取乌木叶片和花剑作为组培外植体；

(2)乌木外植体无菌处理：在超净工作台内使用75％酒精、无菌水、0.1％升汞消毒液对所述外植体进行消毒处理；

(3)愈伤组织和芽的诱导：将经过消毒的所述外植体转移到无菌接种盘内，用无菌滤纸吸去所述外植体表面多余水分，然后对所述外植体进行裁剪，将裁剪后的所述外植体接种到培养基上进行培养，培养后的所述外植体切口边缘处形成大量绿色愈伤组织，随后所述愈伤组织上形成潜在的芽点，再逐渐分化成肉眼可见的绿色不定芽；

所述愈伤组织和所述不定芽的诱导培养基均为改良B5培养基+6-BA 3.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述培养的温度为25±2℃，光照时间为16h/d，所述培养的时间为7-10d左右；

(4)芽的增殖：在所述超净工作台中将所述不定芽分丛，每个不定芽丛中含有1-3个所述不定芽，用无菌解剖刀在所述不定芽的基部轻轻制造一些伤口，然后将所述不定芽丛接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为改良B5培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖为30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述增殖培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16h/d；

(5)生根培养：步骤(4)中的所述不定芽长至2-3cm大小时，在所述超净工作台上从所述不定芽丛基部分开切下单个所述不定芽，并将其转入组培瓶中进行生根培养，所述组培瓶内有生根培养基，所述生根培养基为改良B5培养基+IBA 0.5mg/L+椰子汁90g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述生根培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16h/d；

(6)驯化移栽：步骤(5)的所述不定芽基部长出的不定根达到2-3cm后，将所述组培瓶打开瓶盖，继续培养3-5d天后，将组培苗从所述组培瓶中取出，洗掉根部残留的所述生根培养基，移栽进基质，在湿度为50％-60％的条件下培养7d，然后再在温室下正常培养。

2.根据权利要求1所述的一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，其特征在于：步骤(1)中所述消毒先用所述75％酒精消毒30s-50s，然后用所述无菌水冲洗2-3次，再用所述0.1％升汞消毒5-7min，最后用所述无菌水漂洗3次。

3.根据权利要求1所述的一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，其特征在于：步骤(2)中所述裁剪是将所述叶片剪成0.5cm×0.5cm大小，将所述花剑剪成1cm长短。

4.根据权利要求1所述的一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，其特征在于，所述改良B5培养基的配方为：硝酸钾1000mg，氯化钙150mg，硫酸镁250mg，硫酸铵134mg，磷酸二氢钠150mg，碘化钾0.75mg，硼酸3mg，硫酸锰10mg，硫酸锌2mg，钼酸钠0.25mg，硫酸铜0.025mg，氯化钴0.025mg，硫酸亚铁27.8mg，乙二胺四乙酸二钠37.3mg，肌醇100mg，烟酸1mg，盐酸吡哆醇1mg，盐酸硫胺素6mg。