[发明专利]一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法

说明书

本发明公开了一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，包括乌木外植体的选取、乌木外植体的无菌处理、愈伤组织和芽的诱导、芽的增殖、生根培养、驯化移栽等步骤。本发明采用上述的一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，用乌木叶片和花剑成功诱导分化形成再生植株，极大提高了各部分的利用率，显著提高了外植体的再生频率，为乌木组培快繁奠定了坚实基础，为乌木种苗产业化生产、新品种创制及品质遗传改良等提供技术支持。

技术领域

本发明涉及组织培养快速高效繁殖技术领域，特别是涉及一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法。

背景技术

乌木(Echeveria agavoides'Ebony')，也叫黑檀汁，是景天科(Crassulaceae)拟石莲属(Echeveria)东云(Echeveria Agavoides)系多年生植物，原产墨西哥，具有三大特点：玉底，黑边，颗粒纹。乌木是中大型园艺种，植株叶片光滑，叶片比较宽，叶缘发红发紫，强光照下颜色看起来乌紫色，颈部粗壮，随着生长而逐渐长粗需要阳光充足和凉爽、干燥的环境，耐半阴，怕水涝，忌闷热潮湿，夏季高温时整个植株生长缓慢或完全停止，需要通风良好且适当遮光，避免曝晒，节制浇水，不能长期雨淋，以免植株腐烂，冬天室内能耐零下4℃左右低温，再低会冻伤，干枯死亡。因为它的叶插成活率非常低，生长缓慢，所以不管是在国内还是国外，乌木价格都是很贵。

乌木的繁殖常用一般是扦插和叶插，生长非常慢，同时受季节和栽培技术限制，每年繁殖数量有限，不利于乌木的推广。植物组织培养技术被公认为是目前最高效的植物种苗快繁技术手段。目前，国内利用植物组培技术对乌木进行快繁的文献报道几乎没有，产业化生产体系尚未建立。。

发明内容

本发明的目的是提供一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，提高各部分的利用率、提高外植体的增殖频率及快速繁殖的方法，为乌木种苗产业化生产、新品种创制及品质遗传改良等提供技术支持。

为实现上述目的，本发明提供了一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法包括下列步骤：

(1)乌木外植体的选取：分别选取乌木叶片和花剑作为组培外植体；

(2)乌木外植体无菌处理：在超净工作台内使用75％酒精、无菌水、0.1％升汞消毒液对所述外植体进行消毒处理；

(3)愈伤组织和芽的诱导：将经过消毒的所述外植体转移到无菌接种盘内，用无菌滤纸吸去所述外植体表面多余水分，然后对所述外植体进行裁剪，将裁剪后的所述外植体接种到培养基上进行培养，培养后的所述外植体切口边缘处形成大量绿色愈伤组织，随后绿色愈伤组织上形成潜在的芽点，再逐渐分化成肉眼可见的绿色不定芽；

所述愈伤组织和所述不定芽的诱导培养基均为改良B5培养基+6-BA 3.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述培养的温度为25±2℃，光照时间为16h/d，所述培养的时间为7-10d左右；

(4)芽的增殖：在所述超净工作台中将所述不定芽分丛，每个不定芽丛中含有1-3个所述不定芽，用无菌解剖刀在所述不定芽的基部轻轻制造一些伤口，然后将所述不定芽丛接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为改良B5培养基+6-BA1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖为30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述增殖培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16h/d；

(5)生根培养：步骤(4)中的所述不定芽长至2-3cm大小时，在所述超净工作台上从所述不定芽丛基部分开切下单个所述不定芽，并将其转入组培瓶中进行生根培养，所述组培瓶内有生根培养基，所述生根培养基为改良B5培养基+IBA 0.5mg/L+椰子汁90g/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L，pH为5.7-5.8，所述生根培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16h/d；