[发明专利]点蜂缘蝽突触融合蛋白结合蛋白RpSDP及其应用

权利要求书

1.一种特异性抑制RpSDP基因表达的dsRNA在制备杀虫剂中的用途，

所述dsRNA的通过以下步骤获得：

（1）取点蜂缘蝽若虫，Trizol法提取总RNA，并利用点蜂缘蝽总RNA为模板合成cDNA第一条链；

（2）以点蜂缘蝽cDNA为模板，以序列如SEQ ID NO.2所示的上游引物和序列如SEQ IDNO.3所示的下游引物进行PCR扩增，得到含有的基因片段序列如SEQ ID NO:4所示的PCR扩增产物；

（3）将上述扩增获得的基因片段连接克隆载体，转化到大肠杆菌TG1，在含有氨苄青霉素的LB固体培养基上培养，获得含有目的基因的单克隆菌落；

（4）将单克隆菌落在含有氨苄青霉素的LB液体培养内扩大培养，抽提含有目的基因的质粒；

（5）以质粒为模板，以序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和以序列如SEQ ID NO.6所示的下游引物进行PCR扩增，获得大量的、单一的含有T7启动子的基因片段；

（6）以步骤（5）所述基因片段为DNA模板合成dsRNA，反应体系为：2 µl 10×ReactionBuffer，2 µl ATP solution，2 µl UTP solution，2 µl CTP solution，2 µl GTPsolution，2 µl enzyme mix，1 µg DNA模板，并用无RNase水补齐到20 µl，反应体系配好后混匀，37℃反应过夜；

（7）向反应体系加入1 µlTURBO DNase，37℃反应15 min；

（8）将反应后的样品在65℃变性5 min；

（9）用Nanodrop测定dsRNA浓度，1%琼脂糖凝胶电泳确定dsRNA质量。

2.一种点蜂缘蝽防治方法，其特征是，将特异性抑制RpSDP基因表达的dsRNA喂食点蜂缘蝽，所述dsRNA通过权利要求1所述的步骤（1）到（9）获得。