[发明专利]一种黄皮生物碱的制备方法与应用

权利要求书

1.一种黄皮生物碱的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将黄皮茎叶与甲醇混合回流提取，减压浓缩得到甲醇浸膏；将甲醇浸膏进行酸提碱沉得到黄皮总生物碱和非生物碱部分，对黄皮总生物碱部分进行硅胶柱层析粗分离，得到各次级部分，对以上各部分分别进行抑制轮纹病原菌活性测试后，对活性较强的次级部分进行TLC检测和活性追踪分离，并结合MCI柱层析和RP-18柱层析分离方法对活性生物碱进行分离，最后采用HPLC分离纯化得到活性黄皮生物碱成分；

所述酸为体积分数为4-6％的盐酸，所述甲醇浸膏与盐酸的质量体积比为1:8-1:10；

所述碱沉为用氨水调节pH至9-10；

所 述 黄 皮 生 物 碱 成 分 为mafaicheenamine E、murrayanine、3-formyl-6-methoxycarbazole、claulansine A和lansiumamide C；

硅胶柱层析粗分离时所用的硅胶柱目数为200-300目，洗脱剂为石油醚:丙酮体积比为10:0-0:10，得到33个流分，将这些流分用TLC进行检测，显色剂为5-8％硫酸-无水乙醇，在加热下显色为淡蓝色斑点的各流分按照极性大小不同，合并为9个次级部分Fr.1.1-Fr.2.9；分别取9个次级部分配制供试药液，进行抑制梨轮纹病原菌活性筛选；根据筛选结果选择抑菌活性最强的Fr.2.4、Fr.2.6 和Fr.2.7做进一步活性追踪分离；将Fr.2.4用60目聚酰胺拌样，经中压MCI 柱层析，MCI柱层析的洗脱剂为甲醇与水的体积比为20:80、40:60、60:40、80:20、90:10、100:0进行梯度洗脱，根据TLC检测，将具有相同蓝色斑点的流分合并为5个亚组分Fr.2.4.1-Fr.2.4.5；获得mafaicheenamine E和claulansine A的步骤为将含有主斑点的部分Fr.2.4.2和Fr.2.4.3进行反复硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚:丙酮＝5:1-3:1，经TLC检测，合并主斑点部分，再进一步采用HPLC进行分离和纯化，HPLC的流动相为甲醇:水＝65:35-75:25；

获得 lansiumamide C的步骤为Fr.2.6经中压RP-18柱层析，洗脱 剂为甲醇: 水＝20:80，40:60，60:40，80:20，100:0，经TLC检测，合并得到3个亚组分Fr.2.6.1-Fr.2.6.3，进一步对含有主斑点的Fr.2.6.2进行硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚:丙酮＝5:1-3:1，再经HPLC进行分离和纯化，HPLC的流动相为甲醇:水＝60:40-70:30；

获得murrayanine和 3-formyl-6-methoxycarbazole的步骤为：Fr.2.7经中压RP-18柱层析，洗脱剂为甲醇:水＝20:80、40:60、60:40、80:20、100:0，经TLC检测，合并得到4个亚组分Fr.2.7.1-Fr.2.7.4，将含有主斑点的部分Fr.2.7.2和Fr.2.7.3 进行硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚:丙酮＝5:1-3:1，经TLC检测，合并主斑点部分，再进一步采用HPLC进行分离和纯化，HPLC的流动相为甲醇:水＝65:35-75:25。

2.权利要求1所述制备方法制备所得的黄皮生物碱及其盐在制备抑制轮纹病菌活性产品中的应用；所述黄皮生物碱为mafaicheenamine E、murrayanine、3-formyl-6-methoxycarbazole、claulansine A。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品包括农药、生长抑制剂。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述轮纹病包括苹果、梨轮纹病。

5.一种抑制轮纹病菌活性的农药，其特征在于，所述农药包括权利要求1所述制备方法制备所得的黄皮生物碱或其农药学上容许的盐或可接受的载体；

所述黄皮生物碱为mafaicheenamine E、murrayanine、3-formyl-6-methoxycarbazole、claulansine A。

6.根据权利要求5所述的农药，其特征在于，所述轮纹病包括苹果、梨轮纹病。