[发明专利]一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法

权利要求书

1.一种微生态制剂对DSS诱导的急性结肠炎小鼠治疗作用的方法，其特征在于：包括以下步骤：

探讨合生元制剂对急性UC小鼠的干预作用和可能机制，以期为微生态制剂应用于UC防治提供实验依据；

(1)6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白对照组、UC模型组、合生元干预组，在DSS造模前两周至造模结束采样前，对照组及模型组小鼠每天灌胃给予灭菌水，合生元干预组每天灌胃给予合生元；

(2)空白对照组小鼠每天自由饮用灭菌水，其它组小鼠通过饮用DSS溶液建立UC模型，小鼠每天自由饮用3％DSS溶液，持续7天，第8天处死采样；

(3)造模期间，观察各组小鼠一般情况并记录体重，造模结束后，通过小鼠活体肠镜直视观察结直肠粘膜炎症情况，处死小鼠后，采集小鼠脾脏及结肠，测量脾脏指数，结肠长度，取远端1cm结肠进行组织切片及HE染色，对各组小鼠结肠组织进行病理学损伤评分，通过蛋白免疫印迹及免疫组化检测各组小鼠结肠上皮紧密连接蛋白、粘蛋白以及促炎因子的表达情况；

(4)取各组小鼠的结肠粘膜组织进行16S rDNA测序，比较分析各组小鼠肠道菌群组成情况；

(5)与空白对照组小鼠相比，急性UC模型组小鼠肠壁可见明显病灶溃疡，小鼠体重显著减轻、脾脏指数显著增加和结肠长度显著缩短，模型小鼠结肠组织病理损伤严重，结肠上皮紧密连接蛋白及粘蛋白表达显著下调，而TNF-α表达显著上调；

(6)与急性UC模型组小鼠相比，合生元干预组小鼠肠壁溃疡情况显著改善，小鼠体重显著增加、脾脏指数显著减少和结肠长度显著增加，结肠组织病理损伤评分均显著降低，结肠上皮紧密连接蛋白及粘蛋白表达显著上调，TNF-α表达显著下调；

(7)急性UC模型中各组小鼠的肠道菌群组成存在明显分离，模型组小鼠肠道菌群在门水平上，Deferribacteres显著增加，科水平上，Atopobiaceae、Burkholderiaceae、Deferribacteraceae和Erysipelotrichaceae显著增加，属水平上，Allobaculum和Mucispirillum显著增加，种水平上Mucispirillum SchaedleriASF457显著增加，而合生元干预组小鼠上述菌群变化情况均被显著逆转。

2.根据权利要求1所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述微生态制剂(合生元)主要包括益生菌、益生元，越来越多的科学研究表明微生态制剂在肿瘤免疫、肥胖、糖尿病、炎症性疾病、情绪方面有调控和治疗作用。

3.根据权利要求2所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述益生菌是活的微生物，当给予足够数量的益生菌时，会给宿主健康带来好处，主要包括乳杆菌属、双歧杆菌属、丙酸菌属和链球菌属等的某些菌株。

4.根据权利要求2所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述益生菌通过促进粘膜层的形成，分泌抗菌因子，促进分泌性免疫球蛋白的分泌，增加紧密连接形成，从而调节肠道功能。

5.根据权利要求2所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述益生元是一种不可消化的食物成分，在通过上消化道时不能被代谢或吸收，在结肠中被细菌发酵，选择性增强消化系统中有益细菌的生长或活性，主要包括菊粉、低聚果糖和低聚半乳糖等。

6.根据权利要求2所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述益生元对机体的有益作用与其代谢产物短链脂肪酸(SCFAs)密切相关，SCFAs主要包括乙酸、丙酸和丁酸，它们是肠道上皮细胞的能量来源，同时也是抗炎因子，尤其是丁酸，可以发挥改善和保护肠道屏障的作用。

7.根据权利要求1所述的一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，其特征在于：所述合生元由益生菌和益生元组成，既可发挥益生菌的生理活性，又能选择性的增加益生菌的数量，使其作用更加显著和持久，常见乳酸菌加乳糖醇、双歧杆菌加低聚果糖与低聚半乳糖组合。