[发明专利]一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法

说明书

本发明涉及一种微生态制剂对DSS诱导结肠炎小鼠作用的研究方法，将6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白对照组、UC模型组和合生元干预组，在葡聚糖硫酸钠造模前两周至造模结束采样前，对小鼠进行灌胃处理，其中对照组及模型组小鼠每天灌胃给予灭菌水，合生元干预组分别每天灌胃给予合生元(罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、短双歧杆菌、发酵乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌6种益生菌+低聚麦芽糖GOS+低聚果糖FOS+蓝莓提取物)。通过让小鼠自由饮用DSS溶液，发现该微生态制剂对DSS诱导的急性UC小鼠的治疗作用具有如下效果：合生元制剂可改善急性UC小鼠的肠道菌群紊乱，并有效缓解急性UC小鼠的结肠炎症及肠粘膜屏障损伤状况。

技术领域

本发明涉及微生态制剂技术领域，具体为一种微生态制剂对DSS 诱导急性结肠炎小鼠治疗作用的方法。

背景技术

微生态制剂是利用正常微生物或促进微生物生长的物质制成的活的微生物制剂，一切能促进正常微生物群生长繁殖的及抑制致病菌生长繁殖的制剂都称为微生态制剂，由于其调节肠道之功效，快速构建肠道微生态平衡，无论在婴儿，老人，还是新生畜禽可以防止和治疗腹泻，便秘。

目前，对于溃疡性结肠炎的治疗主要在于诱导并维持临床缓解以及粘膜愈合，防治并发症，改善患者生命质量，加强对患者的长期管理，但大部分患者容易反复发作，无法达到根治效果，现有的药物治疗如氨基水杨酸类可以降低炎症信号因子的表达，但只在轻中度患者中有效，皮质醇类药物作用于免疫细胞和上层细胞，在重度患者中有效，但这类药物有副作用，容易形成药物依赖，生物药物如英夫利昔单抗，可以抑制炎症信号因子的表达，但疗效会随时间减弱，且该类药物对1/3患者没有效果，免疫抑制剂类药物如硫唑嘌呤递送剂，通过限制T细胞数量来缓解炎症，但同时会降低患者的抵抗力，因此，开发具有替代作用的新型疗法成为UC治疗的重要需求。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种微生态制剂对DSS诱导急性结肠炎小鼠具有治疗作用的方法，具备改善急性UC小鼠的肠道菌群紊乱等优点，解决了药物治疗如氨基水杨酸类可以降低炎症信号因子的表达，但只在轻中度患者中有效；皮质醇类药物作用于免疫细胞和上层细胞，在重度患者中有效，但这类药物有副作用，容易形成药物依赖；生物药物如英夫利昔单抗的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种微生态制剂对 DSS诱导急性结肠炎小鼠治疗作用的方法：

探讨合生元对急性溃疡性结肠炎小鼠的干预作用和可能机制，以期为微生态制剂应用于UC防治提供实验依据；

(1)6周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分成空白对照组、UC 模型组、合生元干预组，在DSS造模前两周至造模结束采样前，对照组及模型组小鼠每天灌胃给予灭菌水，合生元干预组每天灌胃给予合生元；

(2)空白对照组小鼠每天自由饮用灭菌水，其它组小鼠通过饮用DSS溶液建立UC模型，小鼠每天自由饮用3％DSS溶液，持续7 天，第8天处死采样；

(3)造模期间，观察各组小鼠一般情况并记录体重，造模结束后，通过小鼠活体肠镜直视观察结直肠粘膜炎症情况，处死小鼠后，采集小鼠脾脏及结肠，测量脾脏指数，结肠长度，取远端1cm结肠进行组织切片及HE染色，对各组小鼠结肠组织进行病理学损伤评分，通过蛋白免疫印迹及免疫组化检测各组小鼠结肠上皮紧密连接蛋白、粘蛋白以及促炎因子的表达情况；

(4)取各组小鼠的结肠粘膜组织进行16S rDNA测序，比较分析各组小鼠肠道菌群组成情况；

(5)与空白对照组小鼠相比，急性UC模型组小鼠肠壁可见明显病灶溃疡，小鼠体重显著减轻、脾脏指数显著增加和结肠长度显著缩短，模型小鼠结肠组织病理损伤严重，结肠上皮紧密连接蛋白及粘蛋白表达显著下调，而TNF-α表达显著上调；