[发明专利]一种特异靶向LRRK2基因的sgRNA及其慢病毒转染载体和应用

权利要求书

1.一种特异靶向LRRK2基因的sgRNA核苷酸序列，其特征在于，所述的sgRNA核苷酸选自下列中的至少一种：

(1)、Lrrk2-sgRNA-1：5’-GCACACTGGCGACTCTCATGT-3’，如SEQ ID NO：1所示；

(2)、Lrrk2-sgRNA-2：5’-GCGCCTGTCAGGGCTGCGACG-3’，如SEQ ID NO：2所示；

(3)、Lrrk2-sgRNA-3：5’-GAAGCTTCTGGACTTCCTCGT-3’，如SEQ ID NO：3所示。

2.一种载有所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体，其特征在于，是通过以下步骤构建的：在权利要求1所述的三个sgRNA核苷酸序列的5’端加上CACC得到正向寡核苷酸，同时根据sgRNA核苷酸序列获得其对应的DNA互补链，并且在互补链的5’端加上AAAC得到反向寡核苷酸，将合成的正向寡核苷酸和反向寡核苷酸变性，退火，形成DNA双链；再将该DNA双链插入质粒框架中替换相应的DNA片段，从而获得了三个慢病毒转染载体，分别命名为：LVPCA01851-1、LVPCA01852-1、LVPCA01853-1。

3.根据权利要求2所述的载有所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体，其特征在于，所述的质粒框架优选为CRISPR/Cas9系统质粒载体。

4.根据权利要求3所述的载有所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体，其特征在于，所述的CRISPR/Cas9系统质粒载体优选为Lenti CRISPR/Cas9 v2质粒。

5.一种被载有特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体转染的细胞株，其特征在于，所述的细胞株含有权利要求2所述的慢病毒转染载体。

6.根据权利要求5所述的被载有特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体转染的细胞株，其特征在于，所述的细胞株优选为大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株。

7.一种利用权利要求2所述的载有所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体敲除LRRK2基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、在权利要求1所述的sgRNA核苷酸序列的5’端加上CACC得到正向寡核苷酸，同时根据sgRNA核苷酸序列获得其对应的DNA互补链，并且在互补链的5’端加上AAAC得到反向寡核苷酸，将合成的正向寡核苷酸和反向寡核苷酸变性，退火，形成DNA双链；

(2)、将步骤(1)获得的双链DNA与CRISPR/Cas9载体连接，得到特异靶向LRRK2基因的sgRNA慢病毒转染载体；

(3)、将步骤(2)制得的慢病毒转染载体转染细胞，对LRRK2基因进行敲除。

8.权利要求1所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA序列在制备帕金森病的药物中的应用。

9.权利要求2所述的载有所述的特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体在制备帕金森病的药物中的应用。

10.权利要求5所述的被载有特异靶向LRRK2基因的sgRNA的慢病毒转染载体转染的细胞株在制备帕金森病的药物中的应用。