[发明专利]一种针对表皮生长因子受体双特异性抗体的Protein A纯化保存方法

权利要求书

1.一种针对表皮生长因子受体双特异性抗体的Protein A纯化保存方法，其特征在于：以Protein A为亲和填料，用蛋白洗脱液洗脱表皮生长因子受体双特异性抗体，将纯化后的表皮生长因子受体双特异性抗体换液保存于蛋白贮存液中；其中，

所述表皮生长因子受体双特异性抗体由表皮生长因子受体抗体和细胞程序性死亡-配体1抗体融合而成；

所述蛋白洗脱液的组成为：

0.08～0.15M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH3.0；

或0.08～0.15M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH3.5。

所述蛋白贮存液的组成为：

0.08～0.15M醋酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 6.0；

或0.08～0.15M醋酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH 6.0；

或0.08～0.15M醋酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 5.0；

或0.08～0.15M醋酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和240～260mM蔗糖，pH 5.0。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白贮存液的组成为：

0.1M醋酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 6.0；

或0.1M醋酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 6.0；

或0.1M醋酸钠和0.1M～0.2M氯化钠，pH 5.0；

或0.1M醋酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 5.0。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述蛋白洗脱液的组成为：

0.1M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 3.0；

或0.1M柠檬酸钠、0.1M～0.2M氯化钠和250mM蔗糖，pH 3.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：蛋白洗脱液洗脱表皮生长因子受体双特异性抗体后，用中和液进行中和，所述中和液为1M Tris-HCl，pH8.9。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：加入蛋白洗脱液后于20-30℃孵育5-10min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：蛋白洗脱液洗脱表皮生长因子受体双特异性抗体时，表皮生长因子受体双特异性抗体溶液与蛋白洗脱液的体积比为20-40：1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：换液保存于蛋白贮存液中时，3500-4500rpm离心浓缩表皮生长因子受体双特异性抗体。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，浓缩后所得表皮生长因子受体双特异性抗体浓缩液与蛋白贮存液的体积比为1：50-100。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法具体包括以下步骤：

(1)用磷酸盐缓冲液清洗Protein A亲和填料；

(2)向层析柱中缓慢加入待纯化的蛋白上清液，重复多次后再次用磷酸盐缓冲液清洗Protein A亲和填料；

(3)向层析柱中加入蛋白洗脱液，20-30℃孵育5-10min后，洗脱表皮生长因子受体双特异性抗体，重复多次至表皮生长因子受体双特异性抗体完全洗脱；

(4)向洗脱后的表皮生长因子受体双特异性抗体中加入中和液，所述中和液为1MTris-HCl，pH8.9；

(5)3500-4500rpm离心得到表皮生长因子受体双特异性抗体浓缩液，加入蛋白贮存液，继续离心，使表皮生长因子受体双特异性抗体处于蛋白贮存液中。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：在步骤(1)和步骤(2)中，所述磷酸盐缓冲液为DPBS，pH7.5。