[发明专利]一种生物素标记苦参碱探针的合成方法有效
| 申请号： | 202111188636.X | 申请日： | 2021-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN113754686B | 公开（公告）日： | 2022-04-19 |
| 发明（设计）人： | 孙娜;李宏全;郭冬冬;凌小雅;孙盼盼;孙耀贵;范阔海;尹伟 | 申请（专利权）人： | 山西农业大学 |
| 主分类号： | C07D519/00 | 分类号： | C07D519/00 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 030801 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 生物素 标记 苦参 探针 合成 方法 | ||
1.一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将苦参碱与氢氧化钾溶于水中，加热回流，自然冷却至室温，加入Boc2O，搅拌10-12h；旋蒸浓缩去除水得到固体，用甲醇和二氯甲烷清洗所得固体，将清洗液浓缩得到油状粗产品；用反相柱纯化得到化合物1；
合成路线为：
(2)将生物素与1-氨基-6-叔丁氧基氨基己烷溶于DMF中，加入EDCI和DMAP，室温搅拌10-12h，加入乙酸乙酯后，分别用饱和食盐水和稀盐酸清洗，然后无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩得到化合物2；
合成路线为：
(3)将化合物2溶于二氯甲烷，冰浴下加入TFA，室温搅拌1h，浓缩得到化合物3；
合成路线为：
(4)将化合物1和化合物3溶于DMF，冰浴下加入EDCI和DMAP，室温搅拌反应10-12h，将反应液倒入甲基叔丁基醚中析出白色固体，过滤得到化合物4；
合成路线为：
(5)将化合物4溶于二氯甲烷中，冰浴下加入TFA，室温搅拌10-12h，旋蒸浓缩得到粗产品，用反相柱纯化粗产品得到白色固体，即为生物素标记苦参碱探针；
合成路线为：
2.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(1)中所述苦参碱与氢氧化钾的摩尔比为1:2；
所述苦参碱与Boc2O的摩尔比为1:1.125；
所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1:10。
3.根据权利要求2所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(1)中所述加热回流温度为105℃，加热回流时间为10-12h；
所述反相柱纯化条件为以乙腈、水、甲酸混合液作为溶剂，乙腈体积分数为5-60％，甲酸体积分数为0.1％，流速为60mL/min。
4.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述生物素与1-氨基-6-叔丁氧基氨基己烷的摩尔比为1:1；
所述生物素与EDCI的摩尔比为1:1；
所述生物素与DMAP的摩尔比为1:0.1。
5.根据权利要求4所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(2)中所述加入乙酸乙酯后用饱和食盐水和稀盐酸清洗3次；
所述稀盐酸的浓度为0.5mol/L。
6.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(3)中所述化合物2的摩尔量与TFA的体积的比为2mmol:3ml。
7.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(4)中所述化合物1与化合物3的摩尔比为0.68:1；
所述化合物3与EDCI的摩尔比为1:1；
所述化合物3与DMAP的摩尔比为1:0.1。
8.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(5)中所述化合物4的质量与TFA的体积的比为275mg:1ml。
9.根据权利要求1所述一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，其特征在于，步骤(5)中所述纯化条件为以乙腈、水、TFA混合液作为溶剂，乙腈体积分数为5-30％，TFA体积分数为0.1％，流速为20mL/min。
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