[发明专利]一种生物素标记苦参碱探针的合成方法

说明书

本发明公开了一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，步骤为：将苦参碱与氢氧化钾溶于水中与Boc2O反应得化合物1；将生物素与1‑氨基‑6叔丁氧基氨基己烷溶于DMF中，加入EDCI和DMAP，得化合物2；将化合物2溶于二氯甲烷，冰浴下加入TFA，得化合物3；将化合物1和化合物3溶于DMF，加入EDCI和DMAP，得化合物4；将化合物4溶于二氯甲烷中，加入TFA，得生物素标记苦参碱探针。本发明探针合成过程中，本发明通过HPLC反相制备柱纯化分离提纯，提高了中间产物纯度；由于终产物极性较大，常规手段难易纯化，本发明通过使用HPLC反相柱分离纯化，提高了终产物的纯度。

技术领域

本发明涉及化学合成技术领域，具体的说涉及一种生物素标记苦参碱探针的合成方法。

背景技术

小分子药物直接作用靶点的发现及鉴定是目前亟待解决的一个关键问题。寻找小分子药物作用靶点最常用的方法是化学蛋白组学技术，它是以生物素标记的小分子药物探针为工具和手段对其作用靶点蛋白进行标记，利用生物素和亲和素之间的高亲和力进行靶蛋白的分离纯化，并通过质谱技术进行靶蛋白的鉴定。

因此，提供一种合成的苦参碱生物素标记探针，为其后续苦参碱作用靶点的发现提供技术支撑是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种生物素标记苦参碱探针的合成方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种生物素标记苦参碱探针的合成方法，包括以下步骤：

(1)将苦参碱与氢氧化钾溶于水中，105℃加热回流10～12h，自然冷却至室温，加入Boc₂O，搅拌12h；旋蒸浓缩去除水得到固体，用甲醇和二氯甲烷清洗所得固体，将清洗液浓缩得到油状粗产品；用反相柱纯化得到化合物1；合成路线为：

(2)将生物素与1-氨基-6叔丁氧基氨基己烷溶于DMF中，加入EDCI和DMAP，室温搅拌10～12h，加入乙酸乙酯后，分别用饱和食盐水和稀盐酸清洗，然后无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩得到化合物2；

合成路线为：

(3)将化合物2溶于二氯甲烷，冰浴下加入TFA，室温搅拌1h，浓缩得到化合物3；

合成路线为：

(4)将化合物1和化合物3溶于DMF，冰浴下加入EDCI和DMAP，室温搅拌反应10-12h，将反应液倒入甲基叔丁基醚中析出白色固体，过滤得到化合物4；

合成路线为：

(5)将化合物4溶于二氯甲烷中，冰浴下加入TFA，室温搅拌10-12h，旋蒸浓缩得到粗产品，用反相柱纯化粗产品(以乙腈、水、TFA混合液作为溶剂，乙腈体积分数为5-30％，TFA体积分数为0.1％，流速为20mL/min)得到白色固体，即为生物素标记苦参碱探针。

合成路线为：

进一步，步骤(1)中所述苦参碱与氢氧化钾的摩尔比为1:2；

所述苦参碱与Boc₂O的摩尔比为1:1.125；

所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1:10；

所述苦参碱的摩尔质量与水的体积比为1:5(mmol：mL)。

更进一步，步骤(1)中所述加热回流温度为105℃，加热回流时间为10-12h；