[发明专利]一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）种子的无菌萌发：将野外采摘的成熟蒴果经过消毒处理后，切开蒴果取出种子接种在萌发培养基中，先进行暗培养30天，而后转移至光照培养，无菌萌发至种子萌发形成原球茎；所述种子的消毒方法为先用75%乙醇浸泡3分钟，再使用2%次氯酸钠浸泡14分钟，然后使用无菌水浸泡摇晃6次，每次摇晃时间一分钟到两分钟；所述种子的萌发培养基组成为3 g/L花宝一号、4 g/L蛋白胨、0.1 g/L活性炭、30 g/L蔗糖、5 g/L琼脂粉的培养基，pH值为5.4；

2）原球茎增殖：将步骤 1）中形成的原球茎转接在诱导原球茎增殖的培养基中，常规培养至分化出较多原球茎；所述原球茎增殖的培养基为1.0 mg/L萘乙酸、2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤、2.0 g/L水解乳蛋白、30 g/L蔗糖、5 g/L琼脂粉的1/2MS培养基，pH值为5.4；

3）原球茎分化出芽：将步骤 1）或步骤 2）中形成的原球茎转接在分化出芽的培养基中，常规培养至分化出不定芽；所述分化出芽的培养基为0.5 mg/L萘乙酸、1.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤、30 g/L蔗糖、5 g/L琼脂粉的1/2MS培养基，pH值为5.4；

4）芽生根：将步骤 3）中形成的大小3-5厘米的芽切下，转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多花兰组培苗；所述生根诱导培养基为2 mg/L萘乙酸、30 g/L蔗糖、5g/L琼脂粉的1/2MS培养基，pH值为5.4；

5）组培苗移栽：将步骤 4）中生根培养30天的组培苗移栽入不同基质中，培养至组培苗成活；所述基质是体积比1:1的腐殖土和火山石混合基质。

2.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤1）中种子无菌萌发形成原球茎的时间是90天。

3.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤2）中原球茎增殖培养20天的增殖效率可达5个原球茎。

4.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤3）中原球茎分化出2厘米芽的培养时间是30天。

5.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤4）中芽生根的时间是10天。

6.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤5）中组培苗移栽培养30天后成活率达90%，且植株生长明显。

7.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤 1）中种子萌发培养条件是先在暗光下培养30天后，而后转入光照培养，光照时间为14h/d，光照强度为2 000 lx，温度为25±1℃。

8.根据权利要求1所述的一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤 2）、3）、4）中常规培养的培养条件为光照强度2000 lx、光照时间14 h/d，恒温培养箱温度为25±1℃。

9.权利要求1-8任一项所述的方法在一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖中的应用。