[发明专利]一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法

说明书

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体公开了一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法。本发明的步骤包括种子的无菌萌发、原球茎增殖、原球茎分化出芽、芽生根和组培苗移栽。本发明所述种子无菌萌发形成原球茎的时间是90天，原球茎增殖的时间是20天，增殖效率可达5个原球茎，原球茎分化出2厘米芽的时间是30天，芽生根的时间是10天，将生根培养30天之后的组培苗移栽入基质中成活率达90％。本发明的方法从原球茎增殖、分化出芽、芽生根到获得多花兰组培苗的培养时间为60天，相比分株繁殖等其他繁殖方式大大缩短了时间，可快速优质的为多花兰的应用提供大量原材料。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法。

背景技术

多花兰(Cymbidium floribundum Lindl.)是兰科兰属的一种附生植物，是《濒危野生动植物种国际贸易公约》附录二物种中的一员，是国家Ⅰ级保护野生植物。多花兰在世界上分布于中国印度等亚洲国家，在国内分布于广东、浙江、云南、海南、湖南等省区。多花兰的叶革质肥厚，并具有光泽，喜阴忌阳直射，喜湿忌干燥，能耐高温和低温，花色艳丽多姿，且花期长，栽培容易，具有较高的观赏价值，是较理想的盆栽花卉之一；多花兰的根可作为药用，滋阴清肺，化痰止咳；多花兰在株型、花朵数以及花色等方面均有丰富的变异，适应性广，在新品种培育中具有重要应用价值。

然而，一方面由于生境退化或丧失、砍伐或直接采挖用于园艺观赏等，实际的开发水平使种群在过去10年减少大于30％；另一方面，多花兰以分株繁殖为主，但繁殖速度慢；种子野外出芽率低；关于多花兰组织培养技术的文献报道不多，且已有的多花兰组织培养基中除了添加植物生长调节剂，还多添加辣木叶汁、构祀叶等营养剂，加大了繁殖成本。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，本发明以多花兰种子为外植体，极大地保护野生物种，提供的培养基大大减少生产成本，并大大缩短了培养时间，可为多花兰的应用提供大量优良的原材料。本发明提供如下技术方案：

一种濒危野生植物多花兰的快速繁殖方法，具体步骤如下：

1)种子的无菌萌发：将野外采摘的成熟蒴果经过消毒处理后，切开蒴果取出种子接种在萌发培养基中，先进行暗培养30天，而后转移至光照培养，无菌萌发至种子萌发形成原球茎；所述种子的消毒方法为先用75％乙醇浸泡3分钟，再使用2％次氯酸钠浸泡14分钟，然后使用无菌水浸泡摇晃6次，每次摇晃时间一分钟到两分钟；所述种子的萌发培养基为包含3g/L花宝一号、4g/L蛋白胨、0.1g/L活性炭的培养基；

2)原球茎增殖：将步骤1)中形成的原球茎转接在诱导原球茎增殖的培养基中，常规培养至分化出较多原球茎；所述原球茎增殖的培养基为包含1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2.0g/L水解乳蛋白的1/2MS培养基；

3)原球茎分化出芽：将步骤1)或步骤2)中形成的原球茎转接在分化出芽的培养基中，常规培养至分化出不定芽；所述分化出芽的培养基为包含0.5mg/L萘乙酸、1.0mg/L 6-苄氨基嘌呤的1/2MS培养基；

4)芽生根：将步骤3)中形成的大小约3-5厘米的芽切下，转接在生根诱导培养基中，常规培养至根形成，获得多花兰组培苗；所述生根诱导培养基为包含2mg/L萘乙酸的1/2MS培养基；

5)组培苗移栽：将步骤4)中生根培养30天的组培苗移栽入不同基质中，培养至组培苗成活；所述基质是体积比1:1的腐殖土和火山石混合基质。

其中，所述步骤1)中种子无菌萌发形成原球茎的时间是90天。

其中，所述步骤2)中原球茎增殖培养20天的增殖效率可达5个原球茎。

其中，所述步骤3)中原球茎分化出2厘米芽的培养时间是30天。

其中，所述步骤4)中芽生根的时间是10天。