[发明专利]一种检测HER2蛋白含量的流式试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种基于流式细胞术检测HER2蛋白含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S10：获取磁珠-一抗复合物，所述磁珠-一抗复合物由磁珠交联HER2第一单抗得到；

S20：获取生物素-二抗复合物，所述生物素-二抗复合物由生物素交联HER2第二单抗得到；

S30：将所述磁珠-一抗复合物加入待检测样本进行免疫反应，用于捕获所述待检测样本中的HER2蛋白，形成磁珠-一抗-蛋白复合物；

S40：将所述生物素-二抗复合物与所述磁珠-一抗-蛋白复合物进行免疫反应，得到磁珠-一抗-蛋白-二抗-生物素复合物；

S50：对所述磁珠-一抗-蛋白-二抗-生物素复合物进行荧光标记，上机检测得到荧光强度值；所述荧光强度值与所述待检测样本中的所述HER2蛋白含量成正比。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述磁珠-一抗复合物的制备包括以下步骤：

S11：对磁珠依次进行一次清洗、活化和二次清洗，得到活化的磁珠；

S12：将所述活化的磁珠和所述HER2第一单抗混合，避光振荡包被，清洗得到磁珠-一抗复合物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，

2mg所述磁珠交联60μg所述HER2第一单抗。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物素-二抗复合物的制备包括以下步骤：

S21：对所述HER2第二单抗进行脱盐处理，得到脱盐的二抗；

S22：将所述脱盐的二抗和生物素交联得到所述生物素-二抗复合物。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S30包括以下步骤：

S31：使用磁珠保存液将所述磁珠-一抗复合物稀释至500-600μg/ml，得到混合物；

S32：每1μl所述混合物和62.5μl稀释液以及12.5μl所述待检测样本混合，室温震荡反应。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述磁珠-一抗复合物和所述生物素-二抗复合物的质量比为1：(80-90)。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述荧光标记选用PE-SA；

所述PE-SA和所述生物素-二抗复合物的质量比为1：1。

8.一种检测HRE2蛋白含量的流式试剂盒，其特征在于，用于如权利要求1-7任一项所述的方法；

所述试剂盒包括：

1μl浓度为500-600μg/ml的磁珠-一抗复合物；

40-45μl生物素-二抗复合物；

所述试剂盒可以检测所述HRE2蛋白浓度为0.25-600ng/ml范围内的所述待检测样本。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包括：

62.5μl稀释液；

40-45μl PE-SA。