[发明专利]一种检测HER2蛋白含量的流式试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种检测HER2蛋白含量的流式试剂盒及检测方法；所述检测方法包括：S10：获取磁珠‑一抗复合物，磁珠‑一抗复合物由磁珠交联HER2第一单抗得到；S20：获取生物素‑二抗复合物，生物素‑二抗复合物由生物素交联HER2第二单抗得到；S30：将磁珠‑一抗复合物加入待检测样本进行免疫反应，用于捕获待检测样本中的HER2蛋白，形成磁珠‑一抗‑蛋白复合物；S40：将生物素‑二抗复合物与磁珠‑一抗‑蛋白复合物进行免疫反应，得到磁珠‑一抗‑蛋白‑二抗‑生物素复合物；S50：对磁珠‑一抗‑蛋白‑二抗‑生物素复合物进行荧光标记，上机检测得到荧光强度值；荧光强度值与待检测样本中的HER2蛋白含量成正比。

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体而言，涉及一种检测HER2蛋白含量的流式试剂盒及检测方法。

背景技术

肿瘤是严重影响公众健康的主要疾病之一，其有效治疗依赖于对肿瘤的早期筛查与及时诊断。肿瘤标志物检测对肿瘤研究和临床治疗实践有着重大作用，已被广泛应用于肿瘤早期筛查、诊断、治疗、疗效评价及预后监测等。

人表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中高表达，目前检测肿瘤组织HER2表达水平已作为一个独立指标用于肿瘤的临床诊断和治疗。传统的HER2检测主要通过创伤性的肿瘤组织活检，使用免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)等方法，但是这些方法不能检测手术治疗后患者或复发及转移性肿瘤患者体内的HER2水平。大量研究表明，HER2片段能从肿瘤细胞表面脱落进入血液，肿瘤病人血清中可溶性的HER2胞外区片段与肿瘤组织的HER2表达水平存在明显相关性。有高达50％以上的转移性乳腺癌患者血清中存在HER2水平升高现象(有研究显示大于某个阈值(如15ng/ml)即可提示肿瘤有进展)，且HER2血清水平及其变化趋势可用作肿瘤治疗效果的评价与预后评估指标。因此HER2血清水平检测在肿瘤诊断和治疗中有着重要的应用价值。

目前市面上的HER-2检测技术主要有免疫组化法、荧光原位杂交法和化学发光法。免疫组化法和荧光原位杂交法不但操作繁琐，价格昂贵，更重要的是不能定量检测样本中的HER-2蛋白含量，从而无法实现对肿瘤患者进行治疗效果评价及预后复发监测。SiemensHealthcare Diagnostics Inc.公司生产的HER-2/neu蛋白测定试剂盒(化学发光法)，作为进口试剂盒，价格较贵，检测范围偏窄(0.5-350ng/mL)，不能完全满足临床需求。现有技术上中，也有专利公开了HER-2检测试剂盒，但是都存在检测范围偏窄的问题。

发明内容

本发明解决的问题是：现有技术中对于HER2蛋白的检测线性范围过窄。

为解决上述问题，本发明提供一种基于流式细胞术检测HER2蛋白含量的方法，包括以下步骤：

S10：获取磁珠-一抗复合物，磁珠-一抗复合物由磁珠交联HER2第一单抗得到；

S20：获取生物素-二抗复合物，生物素-二抗复合物由生物素交联HER2第二单抗得到；

S30：将磁珠-一抗复合物加入待检测样本进行免疫反应，用于捕获待检测样本中的HER2蛋白，形成磁珠-一抗-蛋白复合物；

S40：将生物素-二抗复合物与磁珠-一抗-蛋白复合物进行免疫反应，得到磁珠-一抗-蛋白-二抗-生物素复合物；

S50：对磁珠-一抗-蛋白-二抗-生物素复合物进行荧光标记，上机检测得到荧光强度值；荧光强度值与待检测样本中的HER2蛋白含量成正比。