[发明专利]一株高产脂肪酶菌株及其在油脂降解中的应用

权利要求书

1.一株高产脂肪酶菌株，其特征在于，其分类命名为琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii） WCO-9，已于2021年8月2日在广东省微生物菌种保藏中心登记保藏，保藏编号为GDMCC No：61851。

2.一种如权利要求1所述的高产脂肪酶菌株在油脂降解中的应用。

3.如权利要求2所述的高产脂肪酶菌株在油脂降解中的应用，其特征在于，将植物油和浓度为3～5wt％的PVA混合，超声乳化，制成乳化液，将乳化液和LB培养基混合，接种高产脂肪酶菌株琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii）WCO-9，恒温培养，实现油脂降解。

4.如权利要求3所述的高产脂肪酶菌株在油脂降解中的应用，其特征在于，所述植物油与浓度为3～5wt％的PVA的体积比为1:3～6；所述超声乳化的时间为10～30min；所述乳化液与LB培养基的体积比为3:10～20；所述恒温培养的温度为28～35℃；所述恒温培养的时间为3～5d。

5.如权利要求2所述的高产脂肪酶菌株在油脂降解中的应用，其特征在于，将植物油和浓度为3～5wt％的PVA混合，超声乳化，制成乳化液，将乳化液和LB培养基混合，加入浓度为10wt％罗丹明B制成罗丹明油脂平板，接种高产脂肪酶菌株琼氏不动杆菌（Acinetobacter junii） WCO-9于油脂平板，恒温培养，实现油脂降解。

6.如权利要求5所述的高产脂肪酶菌株在油脂降解中的应用，其特征在于，所述植物油与浓度为3～5wt％的PVA的体积比为1：3～6；所述超声乳化的时间为10～30min；所述乳化液与LB培养基的体积比为3:10～20；所述浓度为10wt％罗丹明B与乳化液的体积比为1:120～180；所述恒温培养的温度为28～35℃；所述恒温培养的时间为3～5d。

7.一种如权利要求1所述的高产脂肪酶菌株在生产脂肪酶中的应用，其特征在于，该高产脂肪酶菌株对C₁₀-C₁₈长链脂肪酸底物的活性在200～2000U/mL。

8.如权利要求7所述的高产脂肪酶菌株在生产脂肪酶中的应用，其特征在于，在长链脂肪酸底物溶液中加入Tris-HCl缓冲液，混匀，然后加入高产脂肪酶菌株培养得到的粗酶液，37℃水浴反应10～15min，加入浓度为10wt％的三氯乙酸终止反应，再加入浓度为10wt％的Na₂CO₃溶液显色，410nm测定光吸收值，利用对硝基苯酚法测定脂肪酶活性。

9.如权利要求8所述的高产脂肪酶菌株在生产脂肪酶中的应用，其特征在于，所述长链脂肪酸底物溶液与Tris-HCl缓冲液的体积比为1:10～13；所述Tris-HCl缓冲液的浓度为40～60mmol/L，pH为8.0；所述长链脂肪酸底物溶液与粗酶液的体积比为6～8:1；所述长链脂肪酸底物溶液与浓度为10wt％的三氯乙酸的体积比为1：2～4；所述长链脂肪酸底物溶液与浓度为10wt％的Na₂CO₃溶液的体积比为1：2～4。

10.如权利要求8所述的高产脂肪酶菌株在生产脂肪酶中的应用，其特征在于，所述粗酶液的生产方式为：将高产脂肪酶菌株划线活化，挑取单菌落于15～30mL LB液体培养基30℃，150～300r/min摇瓶培养12～24h制备种子液，种子液按0.5～2％接种量接种于含有30～60mL LB培养基的发酵瓶中，振荡培养36～72h；发酵液充分摇匀后6000～10000r/min离心3～8min取上清液即为粗酶液；

所述长链脂肪酸底物溶液的生产方法为：取长链脂肪酸底物加入异丙醇中，混匀，得到长链脂肪酸底物溶液；所述长链脂肪酸底物与异丙醇的质量体积比为1.5～4.5mg:1mL；所述长链脂肪酸底物为对硝基苯葵酸、月桂酸、豆蔻酸、硬脂酸、棕榈酸酯中的任意一种。