[发明专利]一种病毒RNA的无探针检测方法

说明书

本发明公开了一种病毒RNA的无探针检测方法，包括以下步骤：步骤1：用RT‑PCR试剂和RT‑PCR模板将病人样本进行孵育；步骤2：从孵育得到的产物中通过介电泳效应DEP分离出PCR产物；步骤3：采用紫外吸收检测得到的PCR产物；本发明不需要探针和荧光染色，成本降低50％以上；并且检测信号基于无样本的正检测、集中信号和低背景信号而增加。此外，RT‑PCR反应的孵育时间因灵敏度高而缩短，检测速度远快于现有的探针检测法。并且采用紫外吸收进行检测，降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，具体涉及一种病毒RNA的无探针检测方法。

背景技术

新的、致命的和高度流行的病毒比上个世纪发生的更频繁，目前RT-PCR是检测病毒RNA最成熟的方法之一。例如在新冠病毒爆发过程中，RT-PCR的荧光探头检测方法是快速筛查可能感染人员的重要方法。这种荧光探头检测技术能在6小时内给出数以百万计的人提供检测结果，并且准确性达到了95％。其过程如图1所示，首先用RT-PCR试剂和带有探针(荧光染料)的RT-PCR模板(针对SARS-Cov-2 RNA)在37℃时(＞4小时)将采集的病人样本(即鼻拭子或咽拭子取得的样本)进行孵育。在此过程中，RT-PCR模板与SARS-Cov-2 RNA靶位点结合，同时PCR产物正在扩增。由于竞争性的结合，探针标记的SS(单链)DNA会被从RT-PCR模板中去除。然后，对样品洗涤或荧光猝灭，检测PCR反应引起的荧光丢失，从而探测患者样本中是否存在SARS-Cov-2 RNA。但是这种方法存在相应的缺陷，由于染料本身、染料附着程序和纯化，与探针结合的RT-PCR模板(荧光染料)的成本即大于50％、反应时间长(＞4小时)、此外由于来自样本的负检测、稀释信号和高背景信号，检测信号存在缺陷。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题提供一种成本较低、灵敏度高的病毒RNA的无探针检测方法。

本发明采用的技术方案是：

一种病毒RNA的无探针检测方法，包括以下步骤：

步骤1：用RT-PCR试剂和RT-PCR模板将病人样本进行孵育；

步骤2：从孵育得到的产物中通过介电泳效应DEP分离出PCR产物；

步骤3：采用紫外吸收检测得到的PCR产物。

进一步的，所述步骤1中的孵育条件如下：

在-10℃～80℃条件下，孵育0min～60min。

进一步的，所述步骤2中的介电泳效应通过施加振荡电场来获取。

进一步的，所述步骤2中将孵育得到的产物置于管道中，通过注射器泵使产物在管道中流动；管道外部电场区域对应位置设置有金属薄膜，通过电压发生器向管道施加振荡电场。

进一步的，所述步骤3中还包括通过凝胶电泳对DNA分离进行定性检测。

进一步的，所述管的直径为0～1m，管的长度为0～10m，管道中产物的流速为0～1米/秒。

进一步的，所述病毒为SARS-CoV-2。

本发明的有益效果是：

(1)本发明采用介电泳效应分离PCR产物，PCR产物由感应偶极子产生的力分离，其力的大小由外加电场强度决定，电场强度大小可以根据实际情况决定；

(2)本发明由于没有探针，其成本大大降低，可以降低50％以上的成本；

(3)本发明检测信号基于无样本的正检测、集中信号和低背景信号而增加，检测灵敏度高；由于检测灵敏度高，可以大大降低孵育时间，检测速度更快；

(4)本发明采用紫外吸收进行检测，检测成本低于荧光发射检测方法。

附图说明