[发明专利]一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法

权利要求书

1.一种巴氏染色液试剂盒，其特征在于，包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；

苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液的pH值为2.0～3.0；

EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液的pH值为5.0～6.0；

缓冲液包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、吐温20、苯氧乙醇、氢氧化钠、水；缓冲液的pH值为6.8～7.2。

2.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述苏木精染色液中各组分浓度为：苏木精2～3g/L，碘酸钠0.2～0.3g/L，硫酸铝15～20g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇100～200mL/L，乙二醇50～150mL/L，丙三醇50～100mL、乙酸10～20mL/L，余量为水。

3.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述EA/OG染色液中各组分浓度为：橘黄G 0.5～2g/L，磷钨酸1～2g/L，亮绿SF淡黄0.2～0.5g/L，水溶伊红3～5g/L，亚硫酸钠0.05～0.1g/L，乙醇200～300mL/L，乙二醇100～200mL/L，甲醇200～300mL/L，异丙醇0～100mL，乙酸10～20mL/L，余量为水。

4.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述缓冲液中各组分浓度为：磷酸二氢钾1～2g/L、磷酸氢二钠0.5～1.5g/L、氯化钠6～10g/L、氯化钾0.1～0.5g/L、吐温201～5mL/L，苯氧乙醇0.5～5mL/L，氢氧化钠2～6mM，余量为水。

5.根据权利要求1所述的巴氏染色液试剂盒，其特征在于，所述清洗液为甲醇、乙醇、异丙醇、丙三醇中的一种或几种。

6.权利要求1至5中任一项所述巴氏染色液试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)苏木精染色液的配制：

①将硫酸铝加入水中，在35～45℃下搅拌溶解，再加入苏木精，搅拌溶解，得到溶液A1；

②将乙醇、乙二醇、丙三醇混合，得到溶液B1；

③将溶液A1与溶液B1混合，将碘酸钠、亚硫酸钠加入所得混合液中，得到溶液C1；

④向溶液C1中加乙酸调节pH；用水定容，过滤；

2)EA/OG染色液的配制：

①将亮绿SF淡黄、水溶伊红、橘黄G、亚硫酸钠加入水中，在35～45℃下搅拌溶解，得到溶液A2；

②将乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇混合，得到溶液B2；

③将溶液A2与溶液B2混合，得到溶液C2；

④向溶液C2中加入乙酸调节pH；用乙醇定容，过滤；

3)缓冲液的配制：

①将磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾加入水中，搅拌溶解，得到溶液A3；

②将苯氧乙醇加入到溶液A3中，然后加入吐温20搅拌溶解，得到溶液B3；

③向溶液B3中加入氢氧化钠调节pH；用水定容。

7.一种巴氏染色方法，其特征在于，采用权利要求1至5中任一项所述巴氏染色液试剂盒对细胞进行染色，具体包括如下步骤：

依次采用清洗液、缓冲液清洗细胞；

采用苏木素染色液对细胞核进行染色；

依次采用缓冲液、清洗液对细胞进行清洗；

采用EA/OG染色液对细胞质进行染色；

采用清洗液对细胞进行清洗；

依次采用无水乙醇、二甲苯对细胞进行冲洗，封片。

8.根据权利要求7所述的巴氏染色方法，其特征在于，所述细胞核染色的时间为2～4分钟。

9.根据权利要求7或8所述的巴氏染色方法，其特征在于，所述细胞质染色的时间为1～3分钟。