[发明专利]一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。该试剂盒包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液pH值为2.0～3.0；EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液pH值为5.0～6.0；缓冲液pH值为6.8～7.2。本发明巴氏染色液染色效果均匀、细胞结构清晰、细胞着色鲜艳，易于临床上观察诊断，其配制方便，染色步骤简洁，效果稳定，细胞对比度清晰，使用寿命长。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。

背景技术

巴氏染色是细胞学临床检验最基本的染色方法之一，不仅适用于妇科细胞学涂片染色如筛查宫颈癌和癌前病变，也适用于胸水、腹水、痰液、细针穿刺等非妇科细胞样本的染色，其染色效果鲜艳、透明性好以及核膜、核仁、染色质结构清晰。细胞中含有多种氨基酸，具有酸碱化学物质，且带有不同电荷，与巴氏染色液中的酸碱化学物质起化学反应，与巴氏染色液中不同电荷的染料结合，从而使分泌物中的脱落细胞染成不同的颜色为原理，用于脱落细胞涂片染色，方便观察诊断。

细胞核染色液主要为苏木素染液，细胞质染色液主要为橘黄G6染液、EA50染液或EA36染液。巴氏染色法将胞核染为深蓝色鳞状上皮底层、中层及表层角化前细胞胞质染绿色，表层不全角化细胞胞质染粉红色，完全角化细胞胞质呈桔黄色细菌灰色；滴虫：淡蓝灰色；黏液：淡蓝色或粉红色；中性粒细胞和淋巴细胞、吞噬细胞胞质均为蓝色；红细胞染粉红色；高分化鳞癌细胞可染成粉红色或桔黄色；腺癌胞质呈灰蓝色。

但传统的巴氏染色方法具有如下缺陷：

1)传统的巴氏染色时，染色细胞核的苏木素染色液中含有剧毒物质氧化汞，本发明采用环保无毒试剂配制。

2)传统的巴氏染色时，染色细胞质的染色液通常采用橘黄G6和EA50或EA36，染色时间长，染色程序繁琐。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种环保无毒快速的高清巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法。本发明采用EA/OG组合型染色液为细胞质染色，染色液成分环保无毒，染色时间快速，制备成本低廉，染色程序简单，染色效果鲜亮，对比度清晰，适合自动化设备应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种巴氏染色液试剂盒，包括苏木素染色液、EA/OG染色液、缓冲液、清洗液；

苏木精染色液包括苏木精、碘酸钠、硫酸铝、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、丙三醇、乙酸、水；苏木素染色液的pH值为2.0～3.0；

EA/OG染色液包括橘黄G、磷钨酸、亮绿SF淡黄、水溶伊红、亚硫酸钠、乙醇、乙二醇、甲醇、异丙醇、乙酸、水；EA/OG染色液的pH值为5.0～6.0；

缓冲液包括磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、吐温20、苯氧乙醇、氢氧化钠、水；缓冲液的pH值为6.8～7.2。

本发明巴氏染色试剂盒中，苏木精染色液用于细胞核的染色，EA/OG染色液用于细胞质的染色，所述染色液对细胞核、细胞质的结构染色清晰、对比度明显，颜色鲜亮，便于临床检验医师做出诊断，清洗液、缓冲液作为染色过程必不可少的辅助试剂配合使用，能起到利于着色、缩短染色时间、使染色效果更佳清晰等重要作用。

进一步的，染色液经过严格过滤和保护剂亚硫酸钠的抗氧化作用，使设备在染色过程中不容易形成结晶性物质。

进一步的，乙酸和氢氧化钠调节pH，使苏木素染色液pH值在2.0～3.0之间，使EA/OG染色液pH值在5.0～6.0之间，使缓冲液pH值在6.8～7.2之间。