[发明专利]稻瘟灵含量检测用半抗原、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种稻瘟灵含量检测用半抗原，其特征在于，化学式为：2-(2-(1,3-二异丙醚-1,3-二氧丙烷-2-亚基)-1,3-二硫戊环)乙酸；化学结构式为：

式（1）。

2.一种如权利要求1中所述半抗原的制备方法，包括以下步骤：

1）丙二酸二异丙酯与二硫化碳在室温下搅拌混匀后，加强碱溶液后室温下搅拌1h后，加入3,4-二氯丁酸并补加强碱溶液、四丁基溴化铵和乙腈，得到原料液；

2）对原料液加热回流反应4h后停止反应，得到反应液；

3）对所得反应液进行旋蒸、提纯分离得到所述稻瘟灵含量检测用半抗原；

步骤3）中所述提出分离步骤包括以下步骤：以乙酸乙酯为溶剂萃取反应液三次后合并所得有机相，水洗有机相，无水硫酸钠干燥蒸干，得到黄色油状物，上硅胶柱，用体积比为3:1的石油醚-乙酸乙酯混合溶液洗脱分离纯化，得到所述稻瘟灵含量检测用半抗原；

所用强碱溶液为2mol/L KOH溶液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3）中所述旋蒸操作包括以下步骤：旋蒸除去反应液中乙腈和二硫化碳后加水和酸溶液，调节反应液pH值到6；

所述酸溶液为6mol/L HCl溶液；每次萃取所用溶剂的体积为100mL。

4.一种稻瘟灵含量检测用抗原，其特征在于，为如权利要求1中所述半抗原与载体蛋白偶联得到的偶联物。

5.根据权利要求4所述的稻瘟灵含量检测用抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。

6.一种稻瘟灵含量检测用抗体，其特征在于，为由如权利要求4或5中任一项所述的抗原经动物免疫得到的抗体；所述抗体能与稻瘟灵发生特异性免疫反应。

7.一种稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所用抗体为权利要求6中所述稻瘟灵含量检测用抗体。

8.根据权利要求7所述的稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述稻瘟灵酶联免疫试剂盒检测样本为经过预处理的烟草样本。

9.根据权利要求7所述的稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒包括：酶标板、工作液；酶标板为如权利要求4或5中所述的抗原；工作液为用辣根过氧化物酶标记的如权利要求6中所述的抗体制备的液体。

10.根据权利要求7所述的稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述稻瘟灵酶联免疫检测试剂盒包括：梯度浓度的稻瘟灵标准品溶液、底物显色A、B液、终止液、洗涤液、复溶液；

所述梯度浓度的稻瘟灵标准品溶液的梯度浓度为0μg/L、0.1μg/L、0.3μg/L、0.9μg/L、2.7μg/L、8.1μg/L；

所述底物显色A、B液：A液为过氧化脲，B液为四甲基联苯胺；

所述终止液为2mol/L硫酸；

所述洗涤液为pH7.2，含0.8%~1.2%吐温-20、0.01‰~0.03‰硫柳汞防腐剂、0.1~0.3mol/L的碳酸盐缓冲液；

所述复溶液为pH 7.6，含8%~12%酪蛋白、0.1~0.3mol/L的磷酸盐缓冲液。