[发明专利]稻瘟灵含量检测用半抗原、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种稻瘟灵含量检测用半抗原、制备方法及其应用，具体涉及一种稻瘟灵酶联免疫检测用半抗原，本发明还公开了所述半抗原的制备方法及其在抗体、试剂盒方面的应用。基于稻瘟灵半抗原建立的酶联免疫试剂盒快速检测产品，使用方便、检测成本低、检测方法高效、准确、快速、可同时检测大批量的样本，适用于农产品尤其在烟草中稻瘟灵的现场监控和大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及农药残留检测技术领域，特别是一种稻瘟灵含量检测用半抗原、制备方法及其应用。

背景技术

稻瘟灵(Isoprothiolane)又名异丙硫环、富士一号，化学名称1,3-二硫戊环-2-亚基丙二酸二异丙酯，是一种高效内吸性杀菌剂，其杀菌谱较窄，是防治稻瘟病的特效药，特别是对穗颈瘟具有优良效果，能通过植物的根、茎、叶各个部位内吸传导，并能达到心叶。其对稻苗瘟和小球菌核病也均有效，大面积使用还可兼治稻飞虱、叶蝉，并对植物生长有调节作用。但随着稻瘟灵的大量施用，可能会污染环境，且增大其在农产品中的残留量，并对人类健康形成潜在威胁。现需对各类农产品中稻瘟灵残留量进行有效、准确的检测。

水果、蔬菜、烟草产品中稻瘟灵残留问题受到越来越多的关注。我国针对不同农作物，制定了稻瘟灵最大残留限量标准，其中西瓜的最大残留限量为0.1mg/kg，大米的最大残留限量为1mg/kg，烟草的最大残留限量为2mg/kg。

目前，现有文献中只出现对谷物、水果、蔬菜中这类杀菌剂残留量的检测报道，而没有见到有关烟叶中残留量的测定方法的报道。国内外对稻瘟灵残留的现有检测方法主要有气相色谱-质谱联用(GC-MS)、高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)、气相色谱法(GC)等。此类仪器分析方法具有检测灵敏度高、特异性强等优势，但是检测样本前处理繁琐、耗时，样品还需提取和净化处理，同时仪器检测方法需要昂贵的大型仪器和设备，配备专业的检测技术人员进行操作和管理，无法进行现场大规模快速检测，时效性差，难以推广。

免疫学检测分析技术以其高灵敏、高特异性、快速、操作简便等优点，已被药物残留检测领域广泛应用，与仪器检测方法相比具有很多优势。但现有技术中缺乏对稻瘟灵具有特异性反应的检测试剂，阻碍了免疫分析检测法在稻瘟灵检测中的运用。

在建立免疫学检测方法并应用该检测方法检测稻瘟灵时，关键技术在于能够获取特异性强、灵敏度高的抗体，而要实现这一目标，前提条件是需要合成、制备出合适的稻瘟灵半抗原。但是，目前国内还没有针对稻瘟灵半抗原的相关报道。

发明内容

本发明提供了一种稻瘟灵含量检测用半抗原、制备方法及其应用，用于解决现有技术中存在的缺乏对稻瘟灵成分具有特异反应的抗体及合成抗体所需半抗原的技术问题。

本发明提供了一种稻瘟灵含量检测用半抗原，化学式为：2-(2-(1,3-二异丙醚-1,3-二氧丙烷-2-亚基)-1,3-二硫戊环)乙酸；化学结构式为：

具有该结构式的半抗原按现有技术中常用方法处理后可制得抗体，该抗体能对经过预处理后的各类农产品样本中所含稻瘟灵产生特异性反应。根据该特性可对稻瘟灵标准品配制溶液后，梯度稀释获得不同浓度稻瘟灵样品后，采用酶标仪在450nm下测量各样本的OD值得到标准曲线后，对待测样本进行预处理后，测定相同波长下的OD值，并通过标准曲线得到对应的浓度，从而实现对样本中所含稻瘟灵含量的定量有效、快速检测。本发明提供半抗原产品如图2所示。

例如对于样本的预处理，以烟叶为例，具体包括以下步骤：用均质器均质烟叶样本；称取1.0g±0.05g均质后的烟叶样本至50mL聚苯乙烯离心管中，加入5mL甲醇溶液，用振荡器振荡5min，混匀，3000g室温

(20～25℃)离心10min；移取10μL上层清液至2mL聚苯乙烯离心管中，加入1990μL复溶液，涡旋仪涡动30s，混匀；取50μL用于分析(稀释倍数：1000)。