[发明专利]一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法

权利要求书

1.一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）过渡金属MOF的制备：采用室温合成法制备，首先将苯多酸金属配合物溶解于50~100 mL无水乙醇中，再加入相同量的超纯水，将水和硝酸盐加入至上述溶液，超声处理至溶解；然后滴加含有1~2 mL三乙胺的10~20 mL环己烷溶液至溶液表面，界面处出现蓝色沉淀，静置10~30 h，将蓝色沉淀用适量水和乙醇洗涤数次，置于20~60℃真空烘箱中干燥5~20 h，即得到过渡金属MOF；

（2）双金属纳米复合材料的制备：采用还原法制备，首先将1%强酸溶液A加入到50~100mL的超纯水中，磁力搅拌下加热至沸腾，然后迅速加入0.5~2 mL，1%强碱弱酸盐，加热15~30min至溶液深红色，再加入1~10 mL，0.1~1 M抗坏血酸和1~5 mL，1%强酸溶液B，加热10~30min，即得到双金属纳米复合材料；

（3）过渡金属MOF及双金属纳米复合材料的制备：将步骤（1）制备的1~5 mg过渡金属MOF溶解于1~5 mL酰胺类化合物中，超声后加入1~3 mL步骤（2）制备的双金属纳米复合材料，室温下搅拌5~12 h后，5000~10000 rpm，离心10~30 min，缓冲液清洗后超声分散于1 mL缓冲液中，即得到过渡金属MOF及双金属纳米复合材料；

（4）过渡金属MOF及双金属纳米复合材料/核酸适配体/金电极的制备：取5~10 μL，1~10mM一端含巯基的ssDNA滴加至预处理后的金电极上孵育37~40℃，1~5 h，再加入3~6 μL，0.1~1 mM封闭剂，孵育30~60 min；将4~10 μL，0.1~1 mM过渡贵金属离子溶液滴加到上述处理后的电极表面，过渡贵金属离子会与含氮碱基结合使得单链DNA形成发夹结构；再将5~10 μL cDNA，滴加于步骤（3）制备过渡金属MOF及双金属纳米复合材料溶液中振荡孵育4~8 h，再将5~10 μL，1~10 μM赭曲霉毒素A及其适配体混合滴加于上述处理后的电极上，37~40℃，孵育2~4 h，缓冲液冲洗后，即完成了过渡金属MOF及双金属纳米复合材料/核酸适配体/金电极的制备；

（5）过渡金属MOF及双金属纳米复合材料/核酸适配体/金电极为工作电极，以饱和氯化银为参比电极，铂丝电极为对电极，通过信号分子的响应完成对赭曲霉毒素A的检测。

2.根据权利要求书1所述的一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的苯多酸金属配合物为H₃BTC，H₃BTB，H₂NDC其中的一种或者多种；水和硝酸盐为三水合硝酸铜，六水合硝酸锰，九水合硝酸铁其中的一种或多种。

3.根据权利要求书1所述的一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的强酸溶液A，B均为氯金酸，氯铂酸，三氯金酸，高氯酸其中的一种；强碱弱酸盐为碳酸钠，乙酸钠，磷酸钠，碳酸氢钠，柠檬酸钠其中的一种或多种。

4.根据权利要求书1所述的一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液，三羟甲基氨基甲烷缓冲液，邻苯二甲酸-盐酸缓冲液其中的一种或者多种。

5.根据权利要求书1所述的一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其特征在于，步骤（4）中所述的酰胺类化合物为N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，N，N-二甲基草酰胺其中的一种或者多种；过渡贵金属离子为铜，银，钼，锌之中的一种；缓冲液为磷酸盐缓冲液，三羟甲基氨基甲烷缓冲液，邻苯二甲酸-盐酸缓冲液其中的一种或者多种。