[发明专利]一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法

说明书

本发明涉及一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，包括以下步骤：以采用室温合成法制备过渡金属MOF，采用还原法制备双金属纳米复合材料，取适量的过渡金属MOF/双金属纳米复合物/核酸适配体以共价键的方式结合至电极表面，以铂丝电极为对电极，饱和氯化银为参比电极，通过过渡金属MOF及贵金属离子信号分子的变化得到了用于赭曲霉毒素A残留检测的电化学适配体传感器。本发明与传统的赭曲霉毒素A检测方法相比，具有响应速度快、检出限低、灵敏度高、重复性好、准确性高的优点。

技术领域

本发明涉及一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，尤其涉及一种基于金属MOF及贵金属离子作为信号分子对赭曲霉毒素A的检测方法。

背景技术

随着我国经济的迅速发展，人们的生活越来越好，人们对于食品的关注渐渐从吃得饱到吃得好，吃得健康。近年来食品问题越来越受到人们的关注，尤其是真菌毒素污染食品的问题较为严重，成为世界各国的重要关注点。其中典型的赭曲霉毒素A广泛存在于受污染的植物性食品中，具有强烈的肾毒性、肝毒性、致癌性等，严重危害到人们的健康，我国卫生部规定谷物及其制品（5.0 μg/kg）、葡萄酒（2.0 μg/kg）和水果（5.0 μg/kg）等食品中赭曲霉毒素A的最高限量，因此加强对食品中赭曲霉毒素A的检测对食品安全及人类的健康有着十分重大的意义。目前赭曲霉毒素的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫吸附法（ELISA）、荧光分析法等，这些方法虽然灵敏度、准确度较高等，但需要昂贵的仪器、分析程序复杂、检测成本高、同时对操作人员的技术水平要求较高、不适合现场检测。因此，建立一种简单、快速、经济、适用于现场检测的方法是对于解决食品中的赭曲霉毒素A超标问题的有效途径之一。

发明内容

本发明涉及一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法。

一种用于赭曲霉毒素A检测的比率型电化学传感器制备方法，其步骤如下：

所述过渡金属MOF的制备：过渡金属MOF采用室温合成法制备，首先将1~5 M苯多酸金属配合物溶解于50~100 mL无水乙醇中，再加入相同量的超纯水，将水和硝酸盐加入至上述溶液，超声处理至溶解。然后滴加含有1~2 mL三乙胺的10~20 mL环己烷溶液至溶液表面，界面处出现蓝色沉淀，静置10~30 h，将蓝色沉淀用适量水和乙醇洗涤数次，置于20~60℃真空烘箱中干燥5~20 h，即得到过渡金属MOF。

所述双金属纳米复合材料的制备：首先将1%强酸溶液A加入到50~100 mL超纯水中，磁力搅拌下加热至沸腾，然后迅速加入0.5~2 mL，1%强碱弱酸盐，加热15~30 min至溶液深红色，再加入1~10 mL，0.1~1 M抗坏血酸和1~5 mL，1%强酸溶液B，加热10~30 min，即得到双金属纳米复合材料。

所述过渡金属MOF及双金属纳米复合材料的制备：将上述制备的1~5 mg过渡金属MOF溶解于1~5 mL酰胺类化合物中，超声后加入1~3 mL制备的双金属纳米复合材料，室温下搅拌5~12 h后，5000~10000 rpm，离心10~30 min，缓冲液清洗后超声分散于1 mL缓冲液中，即得到过渡金属MOF及双金属纳米复合材料。

所述过渡金属MOF及双金属纳米复合材料/核酸适配体/金电极的制备：移取5~10μL, 1~10 mM一端含巯基的ssDNA滴加至预处理后的金电极上孵育37~40℃，1~5 h，再加入3~6 μL，0.1~1 mM封闭剂，孵育30~60 min。将4~10 μL，0.1~1 mM过渡贵金属离子溶液滴加到上述处理后的电极表面，过渡贵金属离子会与含氮碱基结合使得单链DNA形成发夹结构。再将5~10 μL，1~10 μM cDNA，滴加于制备过渡金属MOF及双金属纳米复合材料溶液中振荡孵育4~8 h，再将5~10 μL，1~10 μM赭曲霉毒素A及其适配体混合滴加于上述处理后的电极上，于37~40℃下孵育2~4 h，缓冲液冲洗后，即完成了过渡金属MOF及双金属纳米复合材料/核酸适配体/金电极的制备。