[发明专利]一种牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊及其制备方法

说明书

本发明涉及多糖技术领域，尤其涉及一种牛血清白蛋白‑疏水改性壳聚糖纳米微囊及其制备方法，以正十六烷酸改性壳聚糖，并进一步制备负载抗肿瘤药物的牛血清白蛋白‑疏水改性壳聚糖纳米微囊。本发明所制备的纳米微囊为两层结构，内层为疏水改性壳聚糖、9‑O‑正十八烷基小檗碱和紫杉醇，外层为牛血清白蛋白。该纳米药物能够显著增强紫杉醇对肿瘤细胞的抑制活性。

技术领域

本发明涉及多糖技术领域，尤其涉及一种牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊及其制备方法。

背景技术

紫杉醇是世界闻名的抗肿瘤药物之一，具有独特的作用机制和广泛的抗肿瘤活性。但是，紫杉醇微溶于水，为了提高其溶解性，临床上使用时需要联合乙醇和聚氧乙烯蓖麻油使用，但是联合乙醇和聚氧乙烯蓖麻油使用会增加化疗期间的超敏反应。

现有技术中，通常将紫杉醇做成脂质体制剂，如中国专利CN101011357公开的一种紫杉醇脂质体制剂的制备方法，采用薄膜分散法或喷雾干燥法制备长循环紫杉醇脂质体，以胆固醇、二硬脂酰基磷脂酰胆碱和十四酸为稳定剂，蔗糖为冻干保护剂，氯仿、甲醇为有机溶剂；并且采用两亲性聚乙二醇衍生物修饰脂质体膜，同时采用挤压或高压均质的方法使脂质体粒径≤100nm，包封率≥85%。该方法制得的紫杉醇脂质体制剂具有毒性小，稳定性高的优点，提高了紫杉醇的溶解性，但是脂质体在体内分解、代谢较快，且脂质体紫杉醇仍有严重的副作用，易产生过敏反应、恶心呕吐等症状，限制了使用。

纳米载体载药率高、可延长紫杉醇在体内的循环时间。壳聚糖是天然存在的多糖，具有无毒副作用、生物相容性好、可降解、细胞粘附性好等优点，是一种制备纳米药物载体的理想材料。牛血清白蛋白是来自于血清中的一种球蛋白，起到维持血液渗透压、pH缓冲作用和载体作用，具有出色的生物相容性，因此可用于制备纳米载体，对抗肿瘤药物具有较好的物理保护作用，延长药物在体内的作用时间。但是，壳聚糖和牛血清白蛋白都由亲水性单体组成，制备成纳米载体后，对于疏水性的紫杉醇，其载药率不高，且在体内容易发生渗漏。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中的问题，提供一种在壳聚糖结构中引入疏水性烷基，可以高效负载疏水性紫杉醇，延长药物在体内的运输时间，防止药物渗漏的牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊的制备方法。

本发明的技术方案是：

一种牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊的制备方法，包括以下步骤：

⑴疏水改性壳聚糖的制备：称取正十六烷酸和壳聚糖，加入到溶剂一中，搅拌10~20分钟，控制温度在15~25℃，加入缩合剂和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌0.5~1.5小时，升温至60~90℃，搅拌12~24小时，降温至20~40℃，得到混合液，将所得混合液倾入到溶剂二中，搅拌20~40分钟，过滤，滤饼用洗涤剂洗涤，真空干燥得疏水改性壳聚糖；

所述溶剂一为二甲亚砜或乙醇；

所述缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐或N,N-二异丙基碳二亚胺；

所述溶剂二为异丙醇或乙醇；

所述洗涤剂为乙醇水混合物，其中乙醇和水的质量比为2~4：1；

⑵负载抗肿瘤药物的牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊的制备：取步骤⑴所得的疏水改性壳聚糖，加入到二甲亚砜中，加入9-O-正十八烷基小檗碱和紫杉醇，搅拌5~10分钟，滴加牛血清白蛋白水溶液，滴加速度为2~3滴/秒，滴加完毕后超声10~30分钟，用分子量为3500的透析袋透析24~72小时，冻干得一种负载抗肿瘤药物的牛血清白蛋白-疏水改性壳聚糖纳米微囊；

所述牛血清白蛋白水溶液的质量浓度为0.5~1.5%；