[发明专利]一种基于硅基微流片的CYP2C19基因分型的检测试剂、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种基于硅基微流片的CYP2C19基因分型的检测试剂，作为qPCR反应的缓冲液，其特征在于，包括Tris盐、MgCl₂、KCl、海藻糖、Tween 20、Triton 100、DTT和BSA；所述检测试剂的pH值为8.9-9.2。

2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，包括如下终浓度的组分：500-750mMTris盐、20-40mM MgCl₂、500mM KCl、30-40％(m/v)海藻糖、0.1％(v/v)Tween 20、0.2％(v/v)Triton 100、25-50mmol/L DTT和10mg/ml BSA。

3.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂的pH值是通过浓盐酸进行调整的。

4.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂的配制方法包括如下步骤：

步骤一，称取相应重量的KCl、Tris盐、MgCl₂加入到DEPC水中溶解，完全溶解后加入加浓盐酸调整到预期pH值；

步骤二，向得到的溶液中添加相应质量的海藻糖，适当加热搅拌待完全溶解，适当添加DEPC水；

步骤三，待冷却至室温后，添加DTT和BSA完全溶解；然后加入相应体积的Tween20和Triton100，充分搅拌混匀；

步骤四，定容，充分搅拌均匀，然后无菌过滤，-20℃保存备用。

5.一种含有如权利要求1-4任一项所述的检测试剂的基于硅基微流片的CYP2C19基因分型的试剂盒，其特征在于，主要针对突变型等位基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17进行鉴定。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，还包括引物探针组合物、模板DNA、dNTP、DNA聚合酶、ddH₂O和硅基微流片。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，引物探针组合物包括序列如SEQ ID NO：3～4、SEQ ID NO：7～8和SEQ ID NO：11～12的引物以及选自SEQ ID NO：1～2中的一条探针、选自SEQ ID NO：5～6中的一条探针、SEQ ID NO：9～10中的一条探针；优选地，所述探针标记有荧光基团和淬灭基团；所述荧光基团选自FAM和VIC中的一种，所述淬灭基团为MGB。

8.一种采用如权利要求5-7任一项所述试剂盒的基于硅基微流片的CYP2C19基因分型的方法，其特征在于，所述方法是基于硅基微流片采用荧光定量PCR技术；所述方法包括如下步骤：

步骤一，将qPCR反应体系混合均匀后，使用移液器将qPCR反应液添加到8通道硅基微流片的卡槽中，密封完成，将卡槽置于SPCR超快检测平台；

步骤二，设置荧光定量PCR仪PCR扩增程序，进行检测。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述qPCR反应体系的总体积为10μL，包括如下组分：所述检测试剂1.0μL，引物探针组合物0.2μL，dNTP 0.2μL，DNA聚合酶0.2μL～0.4μL，待测DNA样本2.0μL，余量为水；优选地，所述引物探针组合物中各引物和探针的浓度均为10mM，dNTP的浓度为10mM，DNA聚合酶的浓度为2.5U/μL，待测DNA样本的浓度为0.5-100ng/μL。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为95℃2min；95℃5sec，60℃15sec，40个循环。