[发明专利]一种8a型禽腺病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体公开了一种8a型禽腺病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法和应用。该毒株属于I群E种8a型，命名为DK02株，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V202170。实验表明，本发明DK02株适应于悬浮LMH细胞(鸡肝癌细胞)且产毒量高，致病力强，免疫原性好。本发明还提供的DK02株在制备预防包涵体肝炎的疫苗上的应用。本发明提供一种禽I群腺病毒血清8a型的灭活疫苗，用于预防包涵体肝炎。免疫实验鸡后，能够很好地预防近年来由禽I群8a型腺病毒引起的鸡“包涵体肝炎”，攻毒保护率高，安全性高，抗体产生快，效力稳定。

技术领域

本发明涉及兽用生物制品技术领域，具体涉及一种I群E种8a型禽腺病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

禽腺病毒(Fowladenoviruses)属于腺病毒科的禽腺病毒属成员，为无囊膜的双股DNA病毒。禽腺病毒可分为三个群：禽I群腺病毒具有共同的群抗原，基于交叉中和试验的测定分为5个类型(FAV A～E)，包含12个血清型，代表毒株有血清4型禽I群腺病毒；II群FAV包括火鸡出血性肠炎病毒、雉鸡大理石脾病毒和禽类脾肿大病毒；III群FAV仅包含减蛋综合征病毒(EDSV-76)。禽I群腺病毒具体分为A、B、C、D、E等5个基因型，按照血清型分为1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11型；基因型和血清型的对应关系为A(1)、B(5)、C(4、10)、D(2、3、9、11)、E(6、7、8a、8b)。禽腺病毒在感染初期呈隐性感染，死亡率较低，到了感染后期的时候，不同疾病表现出不同的致病性，临床上由禽腺病毒引起的疾病主要有肌胃糜烂、包涵体肝炎和心包积液－肝炎综合征等。自2012年以来，我国疫情呈上升趋势。

血清8型禽腺病毒又分为8a血清型和8b血清型，主要感染3-8周龄的各种鸡只，总体死亡率通常在10％以下，但有时可达到30％。该病的特征性病理变化为包涵体肝炎，表现为肝脏褪色呈淡褐色至黄色，质脆易碎，肿胀、呈脂肪变性，表面有不同程度的出血点或出血斑，伴发局灶性坏死，在肝细胞核内可见嗜碱性或嗜酸性的包涵体，边缘较大而清晰，呈圆形或形状不规则。有些病例脾脏肿大、出血。组织病理学特征性变化主要为：肝细胞发生脂肪样变并伴有空泡变性以及部分细胞发生破裂，肝细胞萎缩等。在大多数病例中，肝索分解，肝细胞呈现明显的空泡化，染色切片显示肝细胞明显的空泡化是由脂肪变性引起的。变性和坏死的灶性区域在整个肝组织中随机分布。大多数肝细胞可见不同程度的萎缩、核裂解和核溶解并留下一个或多个大空泡组成的悬浮细胞。部分肝细胞可见细胞核肿胀和染色质边缘化。在许多变性的肝细胞中发现了Cowdry A型核内包涵体。禽I群腺病毒的12个血清型均能使包涵体肝炎发生，但主要是FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b和FAdV-11，因血清型和毒株的不同其致病性也存在差异。我国自2012年在10～20周龄的蛋鸡群中开始出现包涵体肝炎，近些年该病在我国的发病率呈上升趋势，给我国的养鸡业造成很大的经济损失。

禽I群腺病毒既可垂直传播，也可水平传播，但主要以垂直传播为主。病毒可以通过种蛋孵化的形式进行垂直传播，此外也有在鸡胚肾细胞、鸡胚肝细胞。以及鸡场发病的雏鸡体内检测到病毒的相关报道。虽然在1日龄的雏鸡体内就可以分离到病毒，但通常情况下病鸡在感染3周后才开始出现排毒，肉鸡的排毒高峰在4～6周龄，蛋鸡在5～9周龄。病毒主要通过直接接触发病鸡只的粪便进行水平传播，但在小范围内，病毒也可通过空气长时间缓慢传播。

由禽I群腺病毒引起的鸡包涵体肝炎，给各国的家禽养殖业造成很大的经济损失，目前市场上使用的大多数疫苗鸡胚或组织灭活苗，免疫效果不太理想。禽I群腺病毒的血清型较多，其病毒特性和致病性差异较大，增大了疫苗研制和应用的难度。E8a作为新近流行的血清型，缺乏具有针对性的疫苗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适应于LMH悬浮细胞培养的血清8a型的禽Ⅰ群腺病毒毒株及其应用。分离、鉴定、筛选中国鸡群感染流行的FAdV-8a型致病毒株，经LMH悬浮细胞培养，得到一株优良的、抗原性优异的疫苗毒株，制备相应的疫苗，将对预防禽Ⅰ群8a型腺病毒感染及其他亚型禽腺病毒的感染具有重要意义。