[发明专利]一种基于核酸介导的酶级联用于肌氨酸的检测方法

权利要求书

1.一种基于核酸介导的酶级联反应的肌氨酸的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：通过核酸调控肌氨酸氧化酶SOX和过氧化物氧化酶HRP之间的间距，以将酶级联反应限定在纳米级的特定区域；

步骤2：显色反应，并测定肌氨酸含量。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1包括：

向SOX酶溶液中加入交联剂，孵育，测定其SOX的浓度；加入第一核酸，孵育使所述第一核酸连接SOX酶分子，获得连接第一核酸的SOX酶分子；其中所述连接第一核酸的SOX酶中每个SOX酶分子连接至少1条第一核酸链；和

向HRP酶溶液中加入交联剂，孵育，测定其HRP酶的浓度；加入第二核酸，孵育使所述第二核酸连接HRP酶分子，获得连接第二核酸的HRP酶分子；其中所述连接第二核酸的SOX酶中每个SOX酶分子连接至少1条第二核酸链。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一核酸和第二核酸是脱氧核糖核酸，且所述第一核酸的序列与所述第二核酸的序列是相同或不同的。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一核酸、第二核酸和第三核酸是寡核苷酸，且所述第一核酸的序列与所述第二核酸的序列是相同或不同的。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一核酸和第二核酸是脱氧核糖核酸，且所述第一核酸的序列与所述第二核酸的序列是相同或不同的。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第一核酸与所述SOX酶的摩尔比为至少5:1，且所述第二核酸与所述HRP酶的摩尔比为至少5:1。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1还包括：通过第三核酸连接所述连接第一核酸的SOX酶和所述连接第二核酸的HRP酶。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述第三核酸的序列不同于所述第一核酸序列。

9.根据权利要求2-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，第一核酸序列为SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，所述第二核酸的序列是SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述三核酸的序列是SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

11.一种用于检测肌氨酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包括：

肌氨酸氧化酶SOX溶液和过氧化物氧化酶HRP溶液，用于连接和稀释肌氨酸氧化酶和过氧化物氧化酶的溶液为DPBS；

第一核酸，用于修饰所述肌氨酸氧化酶SOX，和第二核酸，用于修饰过氧化物氧化酶HRP的第二核酸；

第三核酸，用于连接经修饰的肌氨酸氧化酶SOX和经修饰的过氧化物氧化酶HRP；

酶级联反应的底物；所述底物为肌氨酸溶液，且所述底物溶液的浓度为1-100μM；

其中，所述第一核酸与所述SOX酶的摩尔比为至少5:1，且所述第二核酸与所述HRP酶的摩尔比为至少5:1；第三核酸与连接经修饰的肌氨酸氧化酶SOX和经修饰的过氧化物氧化酶HRP的摩尔比至少为1:1:1。