[发明专利]一种基于核酸介导的酶级联用于肌氨酸的检测方法

说明书

本发明属于化学检测领域，涉及一种基于核酸介导的酶级联用于肌氨酸的检测方法及试剂盒。该方法包括：通过核酸调控肌氨酸氧化酶(SOX)和过氧化物氧化酶(HRP)之间的间距，以将酶级联反应限定在纳米级的特定区域；显色反应，并测定肌氨酸含量。该方法中核酸分子实现间距的精确调控和高特异性。该方法特异性强，效率高，显著提高检测的灵敏度和精确度，所需要的检测设备和场地苛刻度不高，成本低，具有重要的研究意义和应用价值。

技术领域

本发明属于化学检测领域，涉及一种基于核酸介导的酶级联用于肌氨酸的检测方法及试剂盒，更具体地，是一种测定前列腺癌特异性靶标肌氨酸的检测方法及试剂盒。

背景技术

前列腺癌作为男性发病率第二大高的癌症，越来越受到人们的关注。而当前检测前列腺癌的技术主要是通过检测前列腺癌特异性抗原(PSA)，但是PSA检测存在灰度区间2ng/ml-10ng/ml，当PSA含量处于此区间时，其检测准确度不高，这不利于前列腺癌的早期诊断。PSA检测灵敏度、精准度均有待提高。

2009年，Sreekumar等人提出肌氨酸与前列腺癌发展有非常密切的相关性，肌氨酸的含量与疾病的发展具有密切的相关性。传统的肌氨酸测定的方法包括：电化学方法(中国专利CN106596693A，发明名称：一种用于肌氨酸的电化学检测方法)；紫外光谱法：(中国专利CN110702670A，发明名称：一种基于金属有机框架材料的肌氨酸检测方法)；电泳法：(中国专利CN101718746A，发明名称：一种肌氨酸的检测方法)；色谱质谱法(文献：Areproducible and high-throughput HPLC/MS method to separate sarcosine fromα-andβ-alanine and to quantify sarcosine in human serum andurine.Anal.Chem.2011,83,14,5735–5740)。但是，这些检测技术中，大多检测仪器昂贵，需专业人员操作，不适合开发低成本的便携式检测装置。因此，研发一种高灵敏、低成本且快速的检测方法一直是本领域技术人员的需要。

再者，由于肌氨酸是氨基酸小分子，在肌氨酸小分子的特异性和灵敏分析中存在困难。通过高效液相质谱技术检测肌氨酸小分子存在无法有效识别、区别肌氨酸与其他代谢小分子的问题。

发明内容

针对上述现有技术中存在的不足，本发明旨在提供一种操作难度低、成本低、高效且特异性强、灵敏度高的肌氨酸检测方法。

本发明一个目的在于提供一种基于核酸介导的酶级联反应的肌氨酸的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：通过核酸调控肌氨酸氧化酶SOX和过氧化物氧化酶HRP之间的间距，以将酶级联反应限定在纳米级的特定区域；

步骤2：显色反应，并测定肌氨酸含量。

具体地，所述步骤1包括：

向SOX酶溶液中加入交联剂，孵育，测定其SOX的浓度；加入第一核酸，孵育使所述第一核酸连接SOX酶分子，获得连接第一核酸的SOX酶分子；其中所述连接第一核酸的SOX酶中每个SOX酶分子连接至少1条第一核酸链；

向HRP酶溶液中加入交联剂，孵育，测定其HRP酶的浓度；加入第二核酸，孵育使所述第二核酸连接HRP酶分子，获得连接第二核酸的HRP酶分子；其中所述连接第二核酸的SOX酶中每个SOX酶分子连接至少1条第二核酸链。

进一步地，所述步骤1还包括：通过第三核酸连接所述连接第一核酸的SOX酶和所述连接第二核酸的HRP酶。其中，所述第三核酸的序列不同于所述第一核酸序列。