[发明专利]一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条，其特征在于，

所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部，其中，所述结合垫上喷涂有量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有兔抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG；

所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021173；

所述量子点为N，N′-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺偶联羧酸化ZnSe核/CdS复合量子点；

在结合垫上喷涂量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体之前，使用第一处理液对所述结合垫进行处理，处理过程为：将结合垫浸泡在第一处理液中2-10min，取出，37℃烘干；

所述的第一处理液中各组分浓度为0.01M PBS、0.2％Triton X-100、0.5％丙氨酸，0.05％NaN₃，pH7.4；

所述检测线包被时的缓冲液配方成分为0.01M PBS、10％牛血清白蛋白、0.5％聚乙二醇20000、0.1％NaN₃、1％丙氨酸，pH 8.5。

2.如权利要求1所述的基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条，其特征在于，

所述基膜采用硝酸纤维素薄膜。

3.一种制备权利要求1所述的基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条的方法，其特征在于，所述方法包括：

将量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体喷涂到结合垫上；

在基膜的检测线上包被兔抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG；

所述基膜覆盖于底板上，所述结合垫置于所述基膜的上样端，吸水纸置于所述基膜的吸附端，样品垫置于所述结合垫的上部，得到所述基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条；

其中，所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021173；

所述量子点为N，N′-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺偶联羧酸化ZnSe核/CdS复合量子点；

在结合垫上喷涂量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体之前，使用第一处理液对所述结合垫进行处理，处理过程为：将结合垫浸泡在第一处理液中2-10min，取出，37℃烘干；

所述的第一处理液中各组分浓度为0.01M PBS、0.2％Triton X-100、0.5％丙氨酸，0.05％NaN₃，pH7.4；

所述检测线包被时的缓冲液配方成分为0.01M PBS、10％牛血清白蛋白、0.5％聚乙二醇20000、0.1％NaN₃、1％丙氨酸，pH 8.5。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体制备过程为：

将羧酸化ZnSe核/CdS复合量子点和N-羟基琥珀酰亚胺混合，在室温下搅拌反应15-30min，然后加入N，N′-二环己基碳二亚胺和抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，室温下反应1-2h，离心弃掉上清，将沉淀用0.005-0.01M PBS溶解，PBS中含有2-10％牛血清白蛋白、0.5-2％葡萄糖、0.01-0.1％NaN₃，得到所述量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述样品垫处理过程为：

将样品垫浸泡在第二处理液中2-10min，取出，37℃烘干；

所述第二处理液为0.01M PBS、1％Triton X-100、1％牛血清白蛋白、0.05％NaN₃，pH7.4。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，

所述方法还包括样品稀释液的制备，所述样品稀释液的各组分组成为，按照质量百分数计，生理盐水溶液0.9％、牛血清白蛋白5％、吐温20 0.1％、NaN₃ 0.1％、丙氨酸0.5％。