[发明专利]一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条及其制备方法

说明书

本发明公开了一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条及其制备方法，所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部，其中，所述结合垫上结合有量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有兔抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。本发明检测试纸可以快速、灵敏、准确的检测非洲猪瘟病毒的感染，大大缩短了检测时间，为现场检测提供了方便。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种基于量子点的高灵敏度检测非洲猪瘟病毒病原的试纸条及其制备方法。

背景技术

非洲猪瘟病毒(Africa swine fevervirus，ASFV)是引起家猪和野猪发病的一种急性和高传染性的疾病，ASFV可经过口和上呼吸道系统进入猪体，在鼻咽部或是扁桃体发生感染，病毒迅速蔓延到下颌淋巴结，通过淋巴和血液遍布全身。强毒感染时细胞变化很快，在呈现明显的刺激反应前，细胞都已死亡。弱毒感染时，刺激反应很容易观察到，细胞核变大，普遍发生有丝分裂。发病率通常在40％-85％之间，死亡率因感染的毒株不同而有所差异。高致病性毒株死亡率可高达90-100％；中等致病性毒株在成年动物的死亡率在20％-40％之间，在幼年动物的死亡率在70％-80％之间；低致病性毒株死亡率在10％-30％之间。

世界动物卫生组织主要采用分子生物学方法检测非洲猪瘟病毒，主要是各种PCR的方法，包括荧光PCR、等温介导的PCR等。PCR的方法灵敏度高，特异性好，但是需要专门的PCR仪、专业的实验人员以及专门的实验室。很多时候会因为气溶胶的污染导致全部待测样品假阳性结果的出现。许多检测方法主要是指基于抗原抗体反应的胶体金方法，该法灵敏度仅次于PCR方法，对操作人员、操作环境和仪器设备都没有要求，特别适合于现场或基层使用。

综上所述，现有技术检测非洲猪瘟病毒灵敏度低，特异性差，检测过程复杂，亟待研发一种可快速、准确、灵敏地检测非洲猪瘟病毒病原试纸条。

发明内容

为此，本发明提供一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明实施例提供一种基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条，所述试纸条包括底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸，所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫位于所述基膜的上样端，所述吸水纸位于所述基膜的吸附端，所述样品垫位于所述结合垫的上部，其中，所述结合垫上结合有量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体，所述基膜上分别设有检测线和质控线，所述检测线包被有兔抗非洲猪瘟病毒蛋白p72多克隆抗体，所述质控线包被有羊抗鼠IgG。

优选地，所述抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体的杂交瘤细胞株ASFV8G10于2021年07月01日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021173，保藏地址为：中国武汉-武汉大学。

优选地，所述量子点为为N，N′-二环己基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺偶联羧酸化ZnSe核/CdS复合量子点。

优选地，所述基膜采用硝酸纤维素薄膜。

本发明还提供一种制备所述的基于量子点检测非洲猪瘟病毒的试纸条的方法，所述方法包括：

将量子点标记的抗非洲猪瘟病毒蛋白p72单克隆抗体包被到结合垫上；

在基膜的检测线上包被抗非洲猪瘟病毒的多克隆抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG；

所述基膜覆盖于所述底板上，所述结合垫置于所述基膜的上样端，所述吸水纸置于所述基膜的吸附端，所述样品垫置于所述结合垫的上部，得到所述检测试纸条。