[发明专利]一种淫羊藿的DNA条形码、引物对及其应用

权利要求书

1.一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的DNA条形码，其特征在于：

包含ITS2序列：如SEQ ID NO.1 和SEQ ID NO.2 所示；

以及psbA-trnH序列：如SEQ ID NO.3 和SEQ ID NO.4所示。

2.一种箭叶淫羊藿“黔藿1号”的DNA条形码的PCR引物对，其特征在于：所述引物序列：

ITS2序列扩增正向引物：ITS2F: 5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'，

反向引物ITS2R: 5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'；

psbA-trnH序列扩增正向引物：psbAF: 5'-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3'；

反向引物trnHR: 5'-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3' 。

3.权利要求1所述的箭叶淫羊藿“黔藿1号”的DNA条形码或者权利要求2所述的PCR引物对在鉴别箭叶淫羊藿“黔藿1号”物种中的应用。

4.一种如权利要求1所述的箭叶淫羊藿“黔藿1号”的DNA条形码或者如权利要求2所述的PCR引物对的用途，其特征在于：用于鉴定箭叶淫羊藿“黔藿1号”这个品种。

5.一种鉴定箭叶淫羊藿“黔藿1号”的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求2所述的箭叶淫羊藿“黔藿1号”的DNA条形码的PCR引物对。

6.一种定量鉴定箭叶淫羊藿“黔藿1号”的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）从待测样品中提取DNA；

（2）以步骤（1）中提取的DNA为模板，利用PCR引物进行ITS2的扩增；以无菌水为PCR空白对照，以箭叶淫羊藿“黔藿1号”基因组DNA为PCR阳性对照，所述PCR引物：ITS2序列扩增正向引物：ITS2F: 5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'，

反向引物ITS2R: 5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'；

（3）取步骤（2）扩增出的核苷酸片段用琼脂糖凝胶电泳分离，置于凝胶成像系统中观察，当空白对照扩增无任何带型，阳性对照有与理论相符的清晰、单一条带则说明PCR结果可靠；

（4）以ITS2的PCR扩增引物作为测序引物，使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序，进而获得待测样品DNA的ITS2序列；设置以加去离子水代替加模板DNA的PCR反应为阴性对照；

（5）以步骤（1）中提取的DNA为模板，利用PCR引物进行psbA-trnH的扩增；以无菌水为PCR空白对照，以箭叶淫羊藿“黔藿1号”基因组DNA为PCR阳性对照，所述PCR引物：psbA-trnH序列扩增正向引物：psbAF: 5'-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3'；

反向引物trnHR: 5'-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3'；

（6）以psbA-trnH的PCR扩增引物作为测序引物，使用DNA测序仪对目的条带进行双向测序，进而获得待测样品DNA的psbA-trnH序列；设置以加去离子水代替加模板DNA的PCR反应为阴性对照；

若获得的序列与SEQ ID NO.1 至SEQ ID NO.4中的相似度≥99%，则为“黔藿1号”这个物种，若低于这个值则为其他物种。