[发明专利]一种枸橼酸爱地那非遗传毒性杂质检测方法

权利要求书

1.一种检测枸橼酸爱地那非原料药中遗传毒性杂质SM3(4-氨基-1-甲基-3-正丙基吡唑-5-甲酰胺)的方法，其包括：

使用高效液相色谱-质谱串联方法对待测样品进行检测，其中在所述高效液相色谱中，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为流动相A和流动相B的混合液，所述流动相A为水相溶液，所述流动相B为甲醇溶液，洗脱方式是等度洗脱。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述高效液相色谱中，所述流动相A含0.01％甲酸水溶液，所述流动相A和B混合总体积计为100％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述高效液相色谱中，所述流动相A是甲酸水溶液，含甲酸为0.005～0.015％，优选0.01％甲酸体积，和/或所述流动相A和流动相B的体积比为30～50:70～50，优选为40:60。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中在所述高效液相色谱中，柱温为30～50℃，优选为35～45℃。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中在所述高效液相色谱中，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min，优选为1.0mL/min。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中在所述高效液相色谱中，色谱柱填料为苯基硅烷键合硅胶色谱柱，色谱柱粒径为2.5～5μm；色谱柱规格为4.6mm×50～150mm，优选为Agilent Zorbax SB-phenyl，4.6mm×75mm，3.5μm。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中所述质谱采用串联质谱检测器进行，所述串联质谱检测器使用ESI离子源，正离子MRM检测模式。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，在所述质谱中，所述串联质谱检测器的参数为：碰撞能量(Collision Energy)(CE):30～40，优选35，去簇电压(Declusteringpotential)(DP):110～130，优选120，m/z：离子对：母离子182-184→子离子139-141，优选母离子183.2→子离子140.2。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的检测方法，其特征在于，在所述质谱中，所述串联质谱检测器的参数还包括以下：离子化温度(Temperature)(TEM):500～600℃，优选550℃；离子源气体1(GS1)：50～60，优选55；GS2：50～60，优选55。

10.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中所述待测样品采用二甲基亚砜为溶解溶剂，稀释液为以体积比计50～70％甲醇水溶液，优选60％甲醇水溶液。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述供试样品通过以下制备：

1)将爱地那非溶于二甲基亚砜中，溶解成0.1g/mL的储备液；

2)将所述储备液用所述稀释液稀释成浓度为2mg/mL的溶液；

并且对照溶液通过以下制备：

用甲醇溶解SM3对照品以制成1mg/mL的对照品储备液，

将对照品储备液用所述稀释液稀释成100μg/mL对照品储备液1和10μg/mL对照品储备液2；

并且对照品线性溶液通过以下制备：

取对照品储备液1和对照品储备液2制备1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL等一系列线性对照品溶液；

取所述一系列线性对照品溶液和0.1g/mL供试品溶液用所述稀释液依稀分别制成1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、80ng/mL、100ng/mL的对照品线性溶液。

12.根据权利要求1～10所述的方法，其中所述进样体积为：10～25μL，优选15μL。