[发明专利]黏膜适用的类无针注射效果的外泌体制剂及制备方法

说明书

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种黏膜适用的类无针注射效果的外泌体制剂及制备方法。本发明将间充质干细胞与乳酸菌共培养，收集上清，通过超滤浓缩技术根据分子量依次分离间充质干细胞分泌的细胞因子和外泌体，其中细胞因子经脂质体包封，覆被S层蛋白，然后与外泌体按比例混合，制成冻干粉，进而制备成干粉喷雾剂，该干粉喷雾剂具有类似无针注射的透皮吸收效果，通过阴道黏膜给药，不易流失，可以极大的降低损耗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种黏膜适用的类无针注射效果的外泌体制剂及制备方法。

背景技术

随着生物大分子药物的发展，如何安全有效的进行药物递送逐渐成为研究热点。口服途径摄入生物大分子，会经消化道分解失效；有针注射则会引发显著组织损伤，且痛感明显，患者顺应性低，不利于药物的日常使用。因此，生物大分子无针注射技术得到广泛关注，该技术在进行药物递送时不借助针头，利用机械装置产生的瞬间高压将药物以液体针的形式瞬间穿过患者的表皮细胞，使药物像水花一样均匀分布在皮下，注射时无明显刺痛，且吸收面积增加。

从不借助针头、使药物均匀分布在皮下这些方面来说，广义的无针注射理应包含透皮给药途径。透皮给药使用方便，用药次数少，避免胃肠道刺激和肝首过效应，且药物毒副作用低。但是，由于黏膜等屏障的存在，生物大分子类药物成分很难直接通过，所以想达到无针注射效果，其关键在于寻找合适的方法来提高药物的透过量。

阴道是由黏膜、肌层和外膜组成的肌性管道，表面存在许多褶皱，提供扩张性，支撑和增加阴道壁的表面积。阴道壁上血管丰富，血流通过会阴静脉丛流向会阴静脉，最终进入下腔静脉，密集的血管网络使阴道能够成为药物传输的有效途径。阴道黏膜给药起效迅速，不仅可直达病灶部位，发挥局部治疗效果，在阴道炎、宫颈炎等疾病的治疗和避孕等方面具有显著优势，还可避免肝脏首过效应，发挥全身治疗作用。但阴道内环境在正常情况下存在多种细菌以一定的比例生长，比如主要菌种之一的乳酸菌，负责维持阴道的酸性环境，保持pH处于4-4.5，防止致病菌在阴道内繁殖；且阴道可分泌黏液自我清洁，黏液的分泌会导致药物流失，减少药物与阴道黏膜的接触时间，降低预期疗效。加上阴道黏膜具有屏障作用，降低了药物的渗透率。因此，增加药物制剂的黏附性、提高药物制剂的渗透效果是阴道黏膜给药制剂研究的重点与难点。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种黏膜适用的类无针注射效果的外泌体制剂及制备方法。

本发明的目的是提供一种黏膜适用的类无针注射效果的外泌体制剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，干细胞与乳酸菌共培养

以海藻酸钠溶液、CaCl₂溶液和乳酸菌为原料，制备乳酸菌-海藻酸钠凝胶球；

将间充质干细胞以4-7×10⁴个/mL的密度接种于培养容器中，然后置于37℃，5％CO₂，饱和湿度培养箱中培养1d；

将乳酸菌-海藻酸钠凝胶球以10-30个/mL的比例加入上述含间充质干细胞的培养容器中，37℃，5％CO₂，饱和湿度培养箱中共培养1-3d，分别收集上清液和共培养所得乳酸菌-海藻酸钠凝胶球；

步骤2，分离外泌体与细胞因子

步骤1收集的上清液离心去除死细胞，再过滤去除细胞碎片及其它较大粒径的颗粒，最后通过超滤浓缩工艺根据分子量依次分离间充质干细胞分泌的外泌体和细胞因子；

步骤3，制备S层蛋白包被的细胞因子脂质体

将步骤2分离得到的细胞因子复配药物，所得混合溶液注入搅拌状态下的液体磷脂中，然后进行均质处理，得到细胞因子脂质体溶液；