[发明专利]一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法

权利要求书

1.一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)选取脱脂生牛乳作为液态乳；

(2)模拟胃消化

建立不同年龄段Wistar大鼠的胃消化参数，包括指定胃消化pH值、酶解时间、胃消化酶/底物质量比；

配制胃消化缓冲液和胃蛋白酶母液；

胃消化处理：选取步骤(1)中的脱脂生牛乳，将其酸度调至指定胃消化pH值，再加入胃消化缓冲液和胃蛋白酶母液至指定胃消化酶/底物质量比，混匀，消化至指定胃消化时间，冷却，得胃消化液，备用；

(3)模拟肠消化

建立不同年龄段Wistar大鼠的肠消化参数，包括指定肠消化pH值、酶解时间、肠消化酶/底物质量比；

配制肠消化缓冲液和胰酶母液；

肠消化处理：将步骤(2)制备的胃消化液调至指定肠消化pH值，再加入肠消化缓冲液和胰酶母液至指定肠消化酶/底物质量比，混匀，消化至肠消化指定时间，冷却，得肠消化液，备用；

(4)将步骤(3)中的肠消化液离心，取上清液，得可溶性消化产物；

(5)将步骤(4)的可溶性消化产物进行预处理，以去除或失活胰酶；

(6)将步骤(5)预处理后的可溶性消化产物的渗透压调至等渗，然后除菌，得液态乳消化液；

(7)将步骤(6)中的液态乳消化液用于后续肠道细胞培养。

2.根据权利要求1所述模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，其特征是：步骤(2)中建立不同年龄段Wistar大鼠的胃消化参数，包括指定胃消化pH值、酶解时间、胃消化酶/底物质量比，其中胃消化酶是指胃蛋白酶，底物为生牛乳中牛乳蛋白，根据不同年龄段分为：A.模拟幼年Wistar大鼠，1～2周龄，pH＝3.9，时间2.0～2.5小时，胃消化酶/底物质量比1∶120～180；B.模拟成年Wistar大鼠，6～8周龄，pH＝2.8，时间2.0小时，胃消化酶/底物质量比1∶80～100；C.模拟老年Wistar大鼠，20～22周龄，pH＝3.0，时间2.0小时，胃消化酶/底物质量比1∶85～100。

3.根据权利要求1所述模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，其特征是：步骤(3)中建立不同年龄段Wistar大鼠的肠消化参数，包括指定肠消化pH值、酶解时间、肠消化酶/底物质量比，其中肠消化酶是指胰酶，底物是指生牛乳中牛乳蛋白，根据不同年龄段分为：A.模拟幼年Wistar大鼠，1～2周龄，pH＝7.0，时间1.5～2.0小时，肠消化酶/底物质量比1∶50；B.模拟成年Wistar大鼠，6～8周龄，pH＝7.0，时间1.5～2.0小时，肠消化酶/底物质量比1∶50；C.模拟老年Wistar大鼠，20～22周龄，pH＝7.0，时间1.5～2.0小时，肠消化酶/底物质量比1∶50。

4.根据权利要求1所述模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，其特征是：步骤(2)～步骤(3)中所述Wistar大鼠为SPF级雄性大鼠；步骤(2)中～步骤(3)中混匀为37℃恒温水浴摇晃混匀，转速为100～150rpm，冷却为采用冰水中冷却。

5.根据权利要求1所述模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，其特征是：步骤(5)中根据实验目的，所述预处理为高温煮沸法、超滤截留法、蛋白酶抑制法或血清中和法。