[发明专利]一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法

说明书

本发明公开了一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，包括以下步骤：(1)选取脱脂生牛乳；(2)构建胃消化参数，经胃消化处理，得胃消化液；(3)构建肠消化参数，经肠消化处理，得肠消化液；(4)将肠消化液离心，取上清液，得可溶性消化产物；(5)将可溶性消化产物进行预处理；(6)将产物渗透压调至等渗，除菌；(7)用于肠道细胞培养。本发明通过模拟Wistar大鼠的胃肠效果环境，使液态乳的体外消化终点更加接近Wistar大鼠的体内消化结果，提高体外消化的可靠性和真实性；使可液态乳消化产物能够用于体外肠道细胞培养，用以开展各类生物评价试验。

技术领域

本发明属于食品消化与细胞生物学技术领域，具体涉及一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法。

背景技术

液态乳中含有各种基础营养及功能活性物质，同时还可能含有致敏原、农/药残等物质。要了解或评价液态乳中各组分对人体的营养价值、生理学作用以及卫生安全风险，除了采用一般的化学测定，也要采用“生物消化+生物评价”的方法。动物模型和人体临床试验成本高、操作复杂，受环境干扰大，且伴随有伦理(动物福利)问题。体外模拟消化作为上述过程的一种简易替代方法，已经被研究者广泛使用，但不同试验对真实的胃肠消化模拟程度存在差异，降低了试验结果的重复性和参照性。

M.Minekus等人(FoodFunction，2014，5：1113-1124)建立了一套基于“国际共识”的食品体外消化体系，André Brodkorb等人(Nature Protocols，2019，14：991-1014)对此体系又进行了更新升级。但由于食品状态、质构和受试对象的不同会显著影响消化进程，该体系中相关消化参数(pH、时间、酶量等)的取值主要是对现有数据的平均化或一般化，准确度有限。

发明内容

本发明的目的在于提供一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，该方法利用液态乳以及Wistar大鼠精细调整体外的消化参数，可以达到更好的消化模拟效果。此外，在液态乳的消化阶段后增加合适且有效的胰酶消除步骤，使消化产物能够继续用于肠道细胞培养。

本发明的上述目的可以通过如下技术方案来实现：一种模拟大鼠胃肠环境的液态乳体外静态消化及肠道细胞培养的方法，包括以下步骤：

(1)选取脱脂生牛乳作为液态乳；

(2)模拟胃消化

建立不同年龄段Wistar大鼠的胃消化参数，包括指定胃消化pH值、酶解时间、胃消化酶/底物质量比；

配制胃消化缓冲液和胃蛋白酶母液；

胃消化处理：选取步骤(1)中的脱脂生牛乳，将其酸度调至指定胃消化pH值，再加入胃消化缓冲液和胃蛋白酶母液至指定胃消化酶/底物质量比，混匀，消化至指定胃消化时间，冷却，得胃消化液，备用；

(3)模拟肠消化

建立不同年龄段Wistar大鼠的肠消化参数，包括指定肠消化pH值、酶解时间、肠消化酶/底物质量比；

配制肠消化缓冲液和胰酶母液；

肠消化处理：将步骤(2)制备的胃消化液调至指定肠消化pH值，再加入肠消化缓冲液和胰酶母液至指定肠消化酶/底物质量比，混匀，消化至肠消化指定时间，冷却，得肠消化液，备用；

(4)将步骤(3)中的肠消化液离心，取上清液，得可溶性消化产物；

(5)将步骤(4)的可溶性消化产物进行预处理，以去除或失活胰酶；

(6)将步骤(5)预处理后的可溶性消化产物的渗透压调至等渗，然后除菌，得液态乳消化液；

(7)将步骤(6)中的液态乳消化液用于后续肠道细胞培养。