[发明专利]一种检测降纤酶原料及其制剂的活性的方法及应用

权利要求书

1.一种降纤酶活性的检测方法，其特征在于，通过建立降纤酶标准品水解发色底物的水解产物的吸光度值与降纤酶标准品的活力值的标准曲线方程以实现对降纤酶样品活性的检测；所述降纤酶样品包括降纤酶原料或其制剂。

2.根据权利要求1所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

降纤酶样品水解发色底物，得到含对硝基苯胺的水解产物；

利用紫外分光光度仪检测水解产物的吸光度；

将所得吸光度值代入标准曲线方程，计算得到降纤酶样品的活力值；

所述标准曲线方程为Y＝0.0667X+0.0455，R²＝0.9991；其中X为降纤酶标准品的酶活单位(U/ml)，Y为吸光值。

3.根据权利要求2所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，将所述降纤酶样品配制成溶液，再与所述发色底物的工作液混合进行反应；所得降纤酶样品溶液的浓度控制在2-12U/ml之间。

4.根据权利要求3所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，所述发色底物为S-2238；

所述发色底物的工作液浓度为0.2-0.3mg/ml；所述降纤酶样品溶液与所述发色底物的工作液的反应体积比为1:(24-26)。

5.根据权利要求4所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，所述发色底物的工作液浓度为0.25mg/ml，所述降纤酶样品溶液与所述发色底物的工作液的反应体积比为1:25。

6.根据权利要求1-5任一项所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，所述水解的时间为15～20min。

7.根据权利要求6所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，在与所述降纤酶样品混合前，先将发色底物于水浴37℃孵育2min。

8.根据权利要求7所述的降纤酶活性的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制tris-HCl缓冲液，其浓度为20mM～50mM，pH7.4～7.8；

(2)配制降纤酶样品溶液：浓度范围为2-12U/ml；

(3)配制发色底物工作液：浓度范围为0.25mg/ml；

(4)先将发色底物工作液于水浴37℃孵育2min，再将所述降纤酶样品稀释溶液与所述发色底物工作液按体积比例1:25混合进行水解反应；

(5)反应结束后，利用紫外分光光度仪检测水解产物的吸光度；

(6)将所得吸光度值代入标准曲线方程，计算得到降纤酶样品的活力值；

标准曲线为Y＝0.0667X+0.0455，R²＝0.9991；其中X为降纤酶标准品的酶活，单位(U/ml)，Y为吸光值。

9.一种降纤酶制剂处方的筛选方法，其特征在于，采用权利要求1-8任一项所述检测方法对降纤酶制剂处方进行筛选。