[发明专利]燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法

权利要求书

1.燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，具体步骤包括：

I、绘制定量标准曲线并根据曲线计算出燕窝样品中氨基酸含量；

II、燕窝样品前处理

将燕窝粉碎分成两份，一份进行酸水解、定容、稀释、冻干、溶解、定容作为酸水解待测样品；另一份进行碱水解、定容、稀释作为碱水解待测样品；

III、将待测样品与标准物质分别进行超高效液相色谱-串联质谱联用检测分析，通过比较待测样品与标准物质的谱图，判断待测样品中是否含有氨基酸，以完成燕窝中氨基酸的含量测定。

2.根据权利要求1所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述步骤I中绘制标准曲线时所用的标准物质包括如下标准物：天冬氨酸(Asp)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)、甲硫氨酸(Met)和色氨酸(Trp)；

其中天冬氨酸(Asp)、苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)、脯氨酸(Pro)和甲硫氨酸(Met)配制成混合标准溶液；色氨酸(Trp)单独配制成含单一标准物质的标准溶液。

3.根据权利要求1所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱联用的条件包括液相色谱条件和质谱条件；其中，所述液相色谱条件包括色谱柱为C18-AQ，流速为300μL/min，柱温为40℃，以300μL/min的流速进行梯度洗脱；

所述质谱条件包括电喷雾离子化电离源ESI和正离子多反应监测(MRM)。

4.根据权利要求3所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述正离子多反应监测条件包括：接口电压2.5kv；雾化气流量3L/min；加热气流量10L/min；接口温度300℃；DL温度250℃；加热块温度400℃；干燥气流量10L/min；CID气270kpa。

5.根据权利要求3所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述梯度洗脱采用流动相A和流动相B组成，其中流动相A为0.05％甲酸溶液，流动相B为甲醇；及流动相进行梯度洗脱的洗脱程序如下：0-2.50min，流动相A、流动相B的体积百分比分别为100％、0％；3.00min-4.0min流动相A、流动相B的体积百分比分别变换为70％、30％；5.0min-10.00min流动相A、流动相B的体积百分比分别变换为0％、100％；11.0min-16.00min流动相A、流动相B的体积百分比分别变换为100％、0％。

6.根据权利要求1所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述酸水解处理步骤如下：称取燕窝样品置于安瓿瓶中加入6mol/L盐酸溶液和苯酚1-2滴，氮吹后封口，于110℃的恒温箱内水解22h后，取出，冷却至室温，将水解液转移至容量瓶中，水定容至刻度，振荡混匀，静置；移取稀释液移入试管中放入冻干燥机中进行干燥，用水进行溶解，定容容量瓶，离心取清液于进样瓶中以备进样，所述盐酸用量为3-7mL。

7.根据权利要求1所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，所述碱水解处理步骤如下：称取燕窝样品置于安瓿瓶中加入5mol/L氢氧化钠溶液和苯酚1-2滴混匀，氮吹后封口，于110℃的恒温箱内水解22h后，取出，冷却至室温，将水解液转移至容量瓶中，用水定容至刻度，振荡混匀，静置；移取稀释液用水定容，甲酸调pH，所述氢氧化钠用量为2-6mL。

8.根据权利要求1所述的燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，其特征在于，步骤(2)中，待测样品进行超高效液相色谱-串联质谱联用技术检测分析时采用自动进样器进样，进样程序包括：(1)进样体积3-5μL；(2)采用内外壁清洗进样针，清洗量为500μL，进样。