[发明专利]燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法

说明书

本发明公开了一种燕窝中氨基酸的超高效液相色谱‑串联质谱测定方法，属于分析检测技术领域。本发明通过利用超高效液相色谱串联质谱(LC‑MS/MS)，建立了燕窝中氨基酸的定量检测方法。通过采用酸水解联合冻干与碱水解的样品前处理方法，避免样品在水解过程中氨基酸被破坏而无法测量的问题，以及通过利用C18‑AQ色谱柱进行色谱分离和质谱检测器对燕窝中氨基酸含量进行检测，在12分钟内即可完成燕窝中多种氨基酸成分含量的分析。本发明公开的测定方法操作简单快速、准确性高、灵敏且重现性好，适用于燕窝及其他富含蛋白质食品中氨基酸含量的快速检测。

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，尤其涉及燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。

背景技术

燕窝为雨燕科(Apodidae)金丝燕属(Collocalia)中的6种金丝燕在繁殖的季节时分泌出的唾液或唾液与它的羽毛凝结筑就的巢穴。燕窝长期以来被视为一种药食同源的保健食材，养颜美容、润肺生津。燕窝即可作为食材，又可入药，富含蛋白质、氨基酸、唾液酸和无机元素等，研究表明燕窝具有抗氧化、改善免疫、延缓衰老、抗病毒、抑制血凝、调节肠道菌群等功效。

目前对氨基酸检测方法有荧光光谱法、分光光度发、毛细电泳法、近红外光谱法、化学发光法、高效液相色谱法、气相色谱与质谱联用法、液相色谱与质谱联用法、氨基酸自动分析仪等。燕窝中氨基酸检测大部分采用氨基酸自动分析仪，离子交换树脂易压缩，流动相流速的加快不与压力的增加成比例，故测定时间相对较长；氨基酸经离子交换柱分离，在柱后与水合茚三酮衍生剂混合进行反应，易造成柱后扩散比较大，峰形变宽，分辨率降低。

因此，研究出一种操作简单、方法快速、准确、重复性好、成本低的燕窝中氨基酸检测方法是本领域技术人员亟待解决的技术难题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供了一种超高效液相色谱-串联质谱联用技术检测燕窝中氨基酸的检测方法，该方法样品无需衍生、操作简单快速、准确、重复性好，适用于燕窝中氨基酸快速测定。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法，具体步骤包括：

(1)燕窝样品前处理：将燕窝粉碎分成两份，一份进行酸水解、定容、稀释、冻干、溶解、定容作为酸水解待测样品；另一份进行碱水解、定容、稀释作为碱水解待测样品。

(2)将待测样品与标准物质分别进行超高效液相色谱-串联质谱联用检测分析，通过比较待测样品与标准物质的谱图(峰面积、保留时间)，判断待测样品中是否含有氨基酸，标准物质中含有相关的氨基酸标准物质。

优选的，所述超高效液相色谱-串联质谱联用的条件包括：液相色谱条件和质谱条件。

优选的，液相色谱条件包括色谱柱为C18-AQ，流速：300μL/min，柱温：40℃，以300μL/min的流速进行梯度洗脱。

优选的，质谱条件包括电喷雾离子化电离源ESI，正离子多反应监测(MRM)。

优选的，正离子多反应监测包括：接口电压：2.5kv；雾化气流量：3L/min；加热气流量：10L/min；接口温度：300℃；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；干燥气流量：10L/min；CID气：270kpa。

优选的，所述梯度洗脱采用流动相A和流动相B组成，其中流动相A为0.05％甲酸水溶液，流动相B为甲醇。