[发明专利]一种果上叶DNA的提取方法在审
| 申请号： | 202111222676.1 | 申请日： | 2021-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN113736774A | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 杨建波;杨佳红;张旭;罗云;杨艳;张道琴 | 申请（专利权）人： | 贵州光正制药有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 贵州派腾知识产权代理有限公司 52114 | 代理人： | 周黎亚 |
| 地址： | 550000 贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 上叶 dna 提取 方法 | ||
1.一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)按照1：(1.3-1.8)的料液质量比将果上叶置于聚丙烯酰胺溶液中搅拌10-20min，取出冲洗1-2次后，表面喷洒果上叶质量0.1-0.5％的非离子表面活性剂溶液，再经液氮速冻后，研磨成粉末；
(2)将果上叶粉末倒入冷的EP管内，并加入预热至水浴温度的DNA提取溶液，摇匀后水浴30-60min，在水浴期间来回颠倒3-5次；
(3)取出EP管冷却至室温后，加入抽提溶液充分颠倒混匀，12000×g离心5min，取上清液A；所述抽提溶液与DNA提取溶液的体积比为1:1；
(4)将上清液A转入新EP管中，加入氯仿/异戊醇混合物充分颠倒混匀，12000×g离心5min，取上清液B；所述氯仿/异戊醇混合物与上清液A的体积比为1:1；
(5)取上清液B转移到新离心管中，加入0.8-1倍体积的预冷无水乙醇充分颠倒混匀，再静置于-20℃下10-20min，再12000×g离心10min，使DNA充分析出得到DNA沉淀；
(6)水洗DNA沉淀1-2次。
2.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺溶液的体积浓度为10-30％。
3.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂溶液的体积浓度为40-50％。
4.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述非离子表面活性剂选吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、司盘-20、司盘-80中任一种。
5.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述DNA提取溶液为2-3％CTAB，0.08％-0.1％(V/V)β-巯基乙醇，0.01％-0.04％阴离子表面活性剂，1.1-1.3mol/LNaCl。
6.如权利要求5所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠。
7.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述抽提溶液为苯酚:氯仿:异戊醇的体积比为25:24:1的混合物。
8.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述水浴温度为55-60℃。
9.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述氯仿/异戊醇混合物为按体积比为氯仿:异戊醇＝24:1的混合物。
10.如权利要求1所述一种果上叶DNA的提取方法，其特征在于，所述预冷无水乙醇的温度为5-10℃。
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