[发明专利]一种鉴别大黄药材三个基原物种的方法与应用

权利要求书

1.一种鉴别大黄药材三个基原物种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)大黄药材三个基原物种特异DNA条形码的筛选；

基于叶绿体基因组全局比对，筛选rps16-trnQ、psaA-ycf3、psbE-petL、ndhF-rp132与trnT-trnL为鉴别大黄药材三个基原物种的特异DNA条形码。

2)大黄药材三个基原物种特异DNA条形码的获得；

以筛选的高变区rps16-trnQ、psaA-ycf3、psbE-petL、ndhF-rpl32与trnT-trnL序列为模板设计引物1F/1R、2F/2R、3F/3R、4F/4R和5F/5R，并以大黄药材三个基原物种基因组DNA为模板，进行PCR扩增并测序。

3)大黄药材三个基原物种特异DNA条形码的鉴定分析。

根据MEGA7.0计算测序所获高质量序列的种内及种间K2P距离，构建NJ系统进化树，判断特异DNA条形码的物种鉴定效率。

2.根据权利要求1所述引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如表1所示：

表1

3.在不脱离本发明技术原理的前提下，还可对权利要求1和2做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR扩增体系：2×Taq MasterMix12.5μL，上下游引物(2.5μM)各1μL，DNA模板约50ng，加灭菌双蒸水补足体积至25μL。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的PCR反应条件参数：94℃，5min；(94℃，30s，55℃，30s，72℃，45s)，35个循环；72℃，10min。

6.一种用于检测大黄药材三个基原物种的试剂盒，其包括权利要求1和2所述的引物。

7.特异DNA条形码用于大黄药材三个基原物种鉴别的用途，其中所述引物为权利要求1和2中所述的序列。

8.权利要求1和2任一项所述方法在鉴别大黄药材三个基原物种原植物、种子、药材及其它混伪品中的应用。