[发明专利]一种微流控芯片及其制备方法与结合两步微球竞争法在C-反应蛋白检测中的应用

说明书

本发明公开了一种微流控芯片及其制备方法与结合两步微球竞争法在C‑反应蛋白检测中的应用，该微流控芯片，包括位于顶部的PDMS芯片、中部的PDMS薄膜和底部的基板，所述PDMS芯片内设置有不同形状的微通道或微通道阵列、溶液出口和溶液进口，所述溶液进口位于微通道或微通道阵列起始端，所述溶液出口位于微通道或微通道阵列的末端，该微流控芯片可裸眼量化微球数量，直接读出微球数量。本发明所述的微流控芯片结合两步微球竞争法在C‑反应蛋白检测中的应用，可检测浓度范围为10pg/mL～100μg/mL的生物标记物的高精度量化；本发明所述检测方法操作简单便捷、成本低廉、检测精度高，具有很高的实用性和通用性。

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，具体涉及一种微流控芯片及其制备方法与结合两步微球竞争法在C-反应蛋白检测中的应用。

背景技术

C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是由肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，相对分子质量约为120000，是由5个相同的单体以非共价键构成的。CRP 作为全身性炎症反应早期检测的灵敏指标，已在临床许多疾病的诊断、治疗和预后中广泛应用。根据血清、血浆或全血中CRP的浓度水平，可以有效的判断有无感染、疾病的危险程度及疾病是否处于活动期。

目前关于CRP的传统检测方法包括：(1)单向免疫扩散法：单向免疫扩散法重复性好，不需要特殊仪器检测，但易出现假阴性，需稀释重检；(2)免疫比浊法：灵敏度为5.0mg/L，需要自动生化分析仪和自动化免疫测定仪等大型的仪器，耗时长且操作复杂，所需的样品量较大；(3)胶乳凝集法：灵敏度为1.0 mg/L，是一种半定量的检测方法，现在已很少使用；(4)化学发光法：该方法特异性强、线性范围宽，但其检测时间长、需要特定的环境和操作人员；(5) 放射免疫测定法：放射免疫测定灵敏度很高，为3μg/L，但存在有同位素污染等问题。此外还有基于免疫层析法的免疫层析试纸条。免疫层析试纸虽然携带方便，其灵敏度却不高，部分试纸也只能实现定性检测或半定量检测 (CN206235627U、CN201096787等)。

微流控芯片因其结构尺寸小、通量高、样品及试剂消耗小、分析速度快、成本低等优势在近些年迅速普及。微流控芯片的研究是目前分析仪器发展的前沿，用不同材料来加工微流控芯片的技术也在不断发展。传统的微流控芯片是以PDMS(Polydimethylsiloxane，聚二甲基硅氧烷)或硅片为材料，在其上光刻各种微细的结构或是使用光刻和蚀刻的技术制造模板(CN1699984A、 CN203663854U等)。但是该技术需要的设备为昂贵的光刻机或激光雕刻，而且还需要使用光刻胶、显影剂等化学试剂，操作工艺繁琐复杂，光刻的过程会产生辐射，并且化学试剂对实验员的身体也有一定的危害，对实验室有一定的要求。

可视化作为一种简单、直接、快速的方法，已在许多平台上得到了发展。例如比色法是酶联免疫吸附测定(ELISA)中使用最广泛的方法之一，其利用简单直观的颜色变化来得到结果。但当前的可视化平台大多为定性结果，若要实现定量则需要其他的仪器和设备来检测(CN101017176A等)，在资源匮乏的地区很难实现。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种微流控芯片，该微流控芯片可裸眼量化微球数量，直接读出微球数量。

本发明的第二目的在于提供上述微流控芯片的制备方法，该微流控微球堆积芯片的加工方法经济性好、适应性强。

本发明的第三目的在于提供上述微流控芯片结合两步微球竞争法在C-反应蛋白检测中的应用。

本发明的首要目的通过下述技术方案实现：

一种微流控芯片，包括位于顶部的PDMS芯片、中部的PDMS薄膜和底部的基板，所述PDMS芯片内设置有不同形状的微通道或微通道阵列、溶液出口和溶液进口，所述溶液进口位于微通道或微通道阵列起始端，所述溶液出口位于微通道或微通道阵列的末端。