[发明专利]一种用于甲状腺癌检测的标志物及应用、制备及检测方法

权利要求书

1.一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：包括由抗体包被的磁微粒、吖啶酯标记的抗体、校准品、激发液A、激发液B、浓缩洗涤液。

2.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：抗体包被的磁微粒包括但不限于含有鼠抗PCT抗体包被的磁珠、鼠抗Tg抗体包被的磁珠、鼠抗Gal-3抗体包被的磁珠、鼠抗CEA抗体包被的磁珠。

3.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：吖啶酯标记的抗体包括但不限于含有吖啶酯标记的鼠抗PCT抗体、吖啶酯标记的鼠抗Tg抗体、吖啶酯标记的鼠抗Gal-3抗体、吖啶酯标记的鼠抗CEA抗体。

4.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：校准品包括但不限于含有不同浓度的PCT、Tg、Gal-3、CEA纯品。

5.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：激发液A为0.5％的H₂O₂溶液和0.1mol/LHNO₃溶液。

6.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：激发液B为0.35mmol/L的NaOH溶液和3％Triton X-100溶液。

7.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物，其特征在于：浓缩洗涤液为含有Tween-20的PBS缓冲液，pH7.0-8.0。

8.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物在甲状腺癌检测试剂盒中的应用。

9.根据权利要求1给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物的制备方法，其特征在于：

磁微粒包被抗体：取磁微粒用EDC溶液活化后，加入抗体进行分子偶联；

再用含牛血清白蛋白的0.0.1mol/L磷酸盐缓冲液pH7.4进行封闭；

将封闭后的磁微粒置于2～8℃保存备用；

吖啶酯的标记：将吖啶酯加入抗体溶液中，混匀，避光孵育；

将反应液全部透析至0.02mol/L磷酸盐缓冲液pH 7.4中，于–20℃避光保存；

校准品的配制：用标准品缓冲液将标准抗原配制成不同浓度的溶液。

10.根据权利要求9给出的一种用于甲状腺癌检测的标志物的检测方法，其特征在于：

a.首先检测前准备工作：

将试剂盒与待检测的样本从所储存的环境中取出，置于室温环境中大约30分钟；

b.加样：

分别取适量的CT抗体包被的磁珠、Tg抗体包被的磁珠、Gal-3抗体包被的磁珠、CEA抗体包被的磁珠、至1×PBS缓冲液中，配制成混合磁微粒包被抗体的悬浮液；

分别取50μl检测样本和50μl混合磁微粒包被的抗体溶液于孵育杯内混匀，37℃孵育10min；

c.加入吖啶酯标记的抗体试剂：

分别取适量的吖啶酯标记的CT抗体、吖啶酯标记的Tg抗体、吖啶酯标记的Gal-3抗体、吖啶酯标记的CEA抗体至1×PBS缓冲液中，配制成混合的吖啶酯标记的抗体工作液；

取50μl混合的吖啶酯标记的抗体工作液，加入孵育杯内，37℃孵育20min；

d.洗涤：

用洗涤液洗涤2遍；

e.发光：

依次加入50μl激发液A和激发液B，混匀；

f.读值：

测定样本的相对发光强度，根据校准曲线，分别计算出样品中CT抗原、Tg、Gal-3、CEA抗原的浓度。