[发明专利]基于常温原核Argonaute蛋白的核酸检测方法及其应用在审
| 申请号： | 202111228116.7 | 申请日： | 2021-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN114277109A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 刘倩;李晓;冯雁;郭翔;董华蓉 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12N15/11;C12N15/53 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 常温 argonaute 蛋白 核酸 检测 方法 及其 应用 | ||
1.一种用于检测靶标核酸分子的检测体系，其特征在于，该体系包含：
(a)向导ssDNA对；
(b)常温Argonaute蛋白(Ago酶)，所述常温Argonaute蛋白(Ago酶)为以DNA为向导指导剪切靶标DNA的常温Argonaute蛋白(Ago酶)；
(c)荧光报告核酸，所述荧光报告核酸带有荧光基团和淬灭基团；
其中，所述的靶标核酸分子为目标RNA。
2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述检测体系中，目标RNA经过反转录形成靶标DNA，被所述常温Argonaute蛋白(Ago酶)识别剪切。
3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述常温Argonaute蛋白(Ago酶)选自下组：Paenibacillus borealis(PbAgo)、Clostridium butyricum(CbAgo)、Kurthiamassiliensis(KmAgo)及其突变体。
4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的检测体系还含有(d)进行反转录所需的试剂。
5.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述所述的检测体系还含有(f)镁离子溶液。
6.如权利要求5所述的检测体系，其特征在于，所述检测体系中，镁离子的浓度为0.5-5mM，较佳地0.83-1mM。
7.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述Ago酶的工作温度为25-70℃，较佳地30-60℃，更加地37-42℃。
8.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的目标RNA包括单链RNA、双链RNA。
9.一种用于检测靶标核酸分子的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
(i)权利要求1所述的检测体系或用于配制所述检测体系的试剂；和
(ii)使用说明书，所述说明书描述了用所述的检测体系检测靶标核酸分子的方法。
10.一种检测样本中是否存在靶标核酸分子的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)提供权利要求1所述的用于检测靶标核酸分子的检测体系；和
(b)将所述检测体系与待检测的样本在一定温度下进行反应，从而形成第一反应溶液；
(c)对所述第一反应溶液进行荧光检测，从而获得荧光信号值；
其中，所述第一反应溶液中检测到荧光信号值，则表示所述样本中存在靶标核酸分子；而所述第一反应溶液中没有检测到荧光信号值，则表示所述样本中不存在靶标核酸分子。
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