[发明专利]FGFR3基因突变检测在膀胱癌诊断中的应用及试剂盒

权利要求书

1.FGFR3基因突变检测在制备膀胱癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于：对尿脱落肿瘤细胞的细胞核DNA进行FGFR3基因突变位点的检测。

2.如权利要求1所述的FGFR3基因突变检测在制备膀胱癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述FGFR3基因突变位点为R248C、S249C、Y375C其中至少一种。

3.如权利要求2所述的FGFR3基因突变检测在制备膀胱癌诊断试剂盒中的应用，其特征在于：检测R248C突变位点的引物如SEQ ID NO：1～2所示、探针如SEQ ID NO：3所示；检测S249C突变位点的引物如SEQ ID NO：4～5所示、探针如SEQ ID NO：6所示；检测Y375C突变位点的引物如SEQ ID NO：7～8所示、探针如SEQ ID NO：9所示。

4.一种用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括细胞核DNA提取试剂和FGFR3基因突变检测试剂。

5.如权利要求4所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括细胞膜裂解试剂和细胞核分选装置。

6.如权利要求4所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于：所述细胞核DNA提取试剂包括试剂Ⅰ、试剂Ⅱ、试剂Ⅲ、洗涤液I、洗涤液II、洗脱液；

所述试剂Ⅰ的组成为：1～3mol/L的异硫氰酸胍、5～10mmol/L的柠檬酸钠、0.01～0.05g/ml的聚多卡醇、3～5mmol/L的β-巯基乙醇，溶剂为乙醇和水，其中乙醇的体积百分比为15～45％；

所述试剂Ⅱ的组成为：20～50mg/mL的蛋白酶K、10～20mmol/L的Tris-Hcl、0.1～0.5mg/ml的多聚腺苷酸、10～20mmol/L CaCl₂，溶剂为水；

所述试剂Ⅲ的组成为：10～30mg/mL的硅羟基磁珠、体积百分比为30～50％的甘油，溶剂为水；

所述洗涤液I的组成为：1～5mol/LNaCl，1～10mmol/L的Tris-HCl，溶剂为水；

所述洗涤液II的组成为：5～20mmol/L的Tris-HCl、溶剂为乙醇和水，其中乙醇的体积百分比为70～80％；

所述洗脱液的组成为：5～20mmol/L的Tris-HCl，pH值8.2-8.8，溶剂为水。

7.如权利要求4所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于，所述FGFR3基因突变检测试剂的组成为：检测FGFR3基因突变位点R248C、S249C、Y375C的引物和探针，热启动DNA聚合酶，热敏UDG酶，牛血清白蛋白，dATP，dCTP，dGTP，dUTP，MgCl2，Tris；(NH₄)₂SO₄，溶剂为水。

8.如权利要求7所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于，所述FGFR3基因突变检测试剂的各组分在PCR反应体系中的组成为：

引物浓度：100～900nM

探针浓度：25～500nM

热启动DNA聚合酶：1～50U

热敏的UDG酶：0.1～10U

牛血清白蛋白1～5wt％

dATP 0.1～10mM

dCTP 0.1～10mM

dGTP 0.1～10mM

dUTP 0.1～10mM

MgCl₂0.1～10mM

Tris 10～100mM

(NH₄)₂SO₄ 10～100mM

溶剂为水，pH7-9。

9.如权利要求5所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于：所述细胞膜裂解试剂包括体积百分比为0.01％-0.1％的Tween-20，溶剂为水。

10.如权利要求5所述的用于FGFR3基因突变检测的试剂盒，其特征在于：所述细胞核分选装置由微流控芯片组成，包括液体的入口、出口、细胞核分选孔、细胞核收集腔和活塞；所述细胞核分选孔的直径在1-10um之间。